微生物限度检查操作规程2015.doc

微生物限度检查操作规程 目的 建立微生物限度检查操作规程，确保检查结果准确、可靠。 范围 本公司纯化水、产品的初始污染菌检查 职责 质量部QC 依据 2015版《中国药典》通则1105 GB/T19973.1-2005/ISO11737-1:1995 《医疗器械的灭菌 微生物学方法 第１部分：产品上微生物总数的估计GB15980—1995《一次性使用医疗用品卫生标准》 GB15979—2002《一次性使用卫生用品卫生标准》 PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，市售培养基干粉。 0.9%无菌氯化钠溶液。 培养基适用性检查 菌种：培养基灵敏度检查所用的菌株传代数不得超过5代(从菌种存中心获得的干菌种第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以证试验菌株的生物学特性 。[CMCC(B)26 003] 铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104] 枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501] 白色念珠菌[CMCC(F)98 001] 黑曲霉[CMCC(F)98 003] 接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30?35℃培养18?24小时；接种白色念珠菌的培养物至氏葡萄糖液体培养基中或氏葡萄糖琼脂培养基上，20?25℃培养，上述培养物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于cfu(菌落形成）的菌悬液。接种曲霉的培养物至氏葡萄糖琼脂面培养基上，20?25℃培养5?7天，加人3?5 ml 05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液，将孢洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢悬液至无菌试管内，用0.05% (ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml孢子数小于cfu的孢悬液。菌悬液若在室温下放置，应在2小时内用；若保存在℃在内。曲霉孢悬液存在℃，在验证过的贮存期内用。℃，培养不超过3天；沙氏葡萄糖培养基平板置20~25℃，培养不超过5天。每一试验菌平行做2皿。同时，用相应的对照培养基代替被检培养基进行上述试验。被检培养基和对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5~2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的一致。 R2A培养基适用性检查同胰酪大豆胨琼脂培养基。试验菌种为铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌。 供试液制备 供试品检查 平皿法：平皿法包括倾注法和涂布法。每种培养基至少制备2个平皿。 倾注法：取制备的供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入20~25ml温度在50~55℃的胰酪大豆胨琼脂或沙式葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，置规定温度下，倒置培养。 涂布法：取20~25ml温度在50~55℃的胰酪大豆胨琼脂或沙式葡萄糖琼脂培养基，注入直径90mm的无菌平皿中，凝固，制成平皿，去制备的供试液少于0.1ml，均匀涂布与平板上，置规定温度下，倒置培养。 薄膜过滤法：薄膜过滤法所才用的滤膜孔径应不大于0.45um 取相当于1g、1ml或10cm2供试品的供试液，立即过滤，冲洗，冲洗后 取出滤膜，若测定需氧菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂 培养基平板 上；若测定霉菌和酵母菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于沙式 葡萄糖琼脂 培养基平板上，置规定温度下培养。 培养和计数：除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培养基平板在30~35℃培 养3~5天，沙式葡萄糖琼脂培养基平板在20~25℃培养5~7天，观察菌 落生长情况，点计平板上所有菌落数，计数并报告。菌落蔓延生长成片 的平板不宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数， 按菌落数报告规则报告菌数。若同稀释级两个平板的平均菌落数不小于 15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。滤膜的培养及计数同平 皿法，每张滤膜上的菌落数应不超过100cfu。 菌数报告规则：需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于300cfu的稀释级； 霉菌、酵母菌总数测定宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级。取最高 的平均菌落数，计算1g、1ml或10cm2供试品所含的微生物数，去两位 有效数字报告。薄膜过滤法的菌数报告，以相当于1g、1ml或10cm2供 试品的菌落数报告菌数。若各稀释级的平板或滤膜上，无菌生长，以1 报告菌数，或1乘以最大稀释倍数的值报告菌数。 纯化水微生物限度检查：按薄膜过滤法检查，R2A 琼脂培养基平板， 置30~35℃培养不少于5天 结果判断：若供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的检验结果均符 合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若有其中一项不符合该品种 下的规定，判供试品不符合规定。 需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基或R2A琼脂培养基上生长的总