第十章 病毒类疫苗.ppt

第十章 病毒类疫苗 第一节 概述 一.病毒类疫苗 定义：用病毒、衣原体、立克次体或其衍生物制成，进入人体后使机体产生抵抗相应细病毒能力的生物制品 种类 1.按用途分类：脊髓灰质炎、麻疹等疫苗 2.按病毒培养的组织来源和制造方法分类： 动物培养疫苗、鸡胚培养疫苗、细胞培养 疫苗、基因工程疫苗 3.按理化性状分类： ①是否被灭活②是否被裂解③有无佐剂④物 理状态 二.病毒培养方法 1.细胞培养法 生物制品生产用细胞的分类： ①原代细胞和二倍体细胞：用于疫苗的制备和 分离及建立毒株 ②传代细胞：用于检定 ③杂交瘤细胞：用于制备单克隆抗体 生产用细胞库的原始细胞库、主细胞库、工作 细胞的三级管理模式 原始细胞库（PCB） 主细胞库（MCB） 工作细胞库（WCB） 2.鸡胚培养法 细胞培养技术发明之前被广泛使用，鸡胚来源 容易，操作简单，至今仍用于痘类病毒、黏液 病毒等的研究，黄热病疫苗、流感等疫苗仍用 鸡胚培养法生产 3.动物培养法 动物是最早用于病毒的分离、鉴定、和疫苗制 备的材料，具有对人类病毒敏感、易饲养、繁 殖快、显性指标明确等优点，但动物携带的外 源因子以及疫苗中残留的动物组织均影响疫苗 的安全性，必将被其他技术代替 三.疫苗生产用毒株和细胞的要求 1.毒种要求 1）来源 必须建立毒株的完整资料，包括病毒分离、全 面质控、临川研究等资料 2）管理 由SFDA批准，国家指定机构保存，三级管理 模式管理，规定传代水平内使用 3）质控项目 ①鉴别试验 ②病毒外源因子检查 ③猴体神经毒力试验 ④免疫原性检查 ⑤其他试验 2.细胞要求 ①原代细胞。小动物清洁级，鸡群SPF级 ②二倍体细胞。由SFDA批准，国家指定机构 保存，三级管理模式管理，规定传代水平内使 用 ③传代细胞。 ④细胞质控。按药典要求进行检定 第二节 肝炎疫苗 肝炎病毒是一组以肝脏为主要宿主细胞的病毒 ，主要有甲、乙、丙、丁、戊、己、庚型7中 肝炎病毒，其中能引起临床疾病的主要是前五 种 一.乙型肝炎病毒及乙肝疫苗 1.乙肝的流行病学 1）地区分布 2）流行特点 HBV感染转成慢性感染的可能性与初始感染年 龄呈负相关，如果患者没能在6个月内清除HB V，那么HBV将由急性转为慢性，如果患者没 有临床症状，肝功能检验正常，这些慢性感染 者就是慢性携带者 3）传染源及传播途径 乙肝的传染源是乙肝患者和HBV携带者，其传 播途径主要有两条： ①母婴传播，又叫垂直传播 ②水平传播，包括密切接触、医源性传播、及 性传播等 2.HBV的病原学 1）在血液中存在的三种形态 ①Dane颗粒 ②22nm小圆球颗粒，不含核酸，主要成分是 乙肝表面抗原 ③杆状颗粒，不含核酸，可能成为完整HBV 的外壳 2）病毒的复制 1．HBV吸附并进入肝细胞后，脱去衣壳，病毒的DNA进入肝细胞核内。 2．在DNA聚合酶的催化下，以负链DNA为模板，延长修补正链DNA裂隙区，使形成完整的环状双链DNA（convalently closed circular double-stranded DNA, cccDNA）。 3．双链DNA继而形成超螺旋环状DNA，在细胞RNA聚合酶的作用下，以负链DNA为模板，转录形成长度分别为2.1kb、2.4kb、0.8kb和3.5kbRNA。2.1kb和2.4kb?RNA作为mRNA翻译表面蛋白；3.5kb?RNA除翻译核心蛋白和DNA聚合酶外，还作为HBV DNA复制的模板，故亦称其为前基因组（pregenome）。 4．病毒的前基因组、蛋白引物及DNA聚合酶共同进入组装好的病毒内衣壳中。 5．在病毒DNA聚合酶的逆转录酶活性作用下，自DR区开始，以前基因组RNA为模板，逆转录出全长的HBV DNA负链。在负链DNA合成过程中，前基因组被RNA酶降解。 6．?病毒以新合成的负链DNA为模板，也自DR区开始复制互补的正链DNA。 7．复制中的正链DNA（长短不等）与完整的负链DNA结合并包装于内衣壳中，再包上外衣壳成为病毒体，从细胞质释放至细胞外。 3）HBV的抗原结构 （1）HBsAg HBsAg大量存在于感染者血中，是HBV感染的主要标志。HBsAg具有抗原性，可引起机体产生特异保护性的抗-HBs，也是制备疫苗的最主要成分。HBsAg存在不同的血清亚型，各亚型均含有一共同抗原表位（称为a抗原），此外，还有二组互相排斥的亚型抗原表位（d/y和w/r）。按不同的组合形式，构成HBsAg四个基本亚型，即adr、adw、ay