细胞工程实验期末考试题及答案.doc

外植体：植物组织培养中的各种接种材料，包括植物体的各种器官、组织、细胞和原生质体等 接种：把经过严格的表面灭菌处理的植物材料经无菌操作手续接种到无菌培养基上的全部操作过程。 原生质体：是指除去细胞壁后被原生质所包围的“裸露细胞”。 脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象 热处理脱毒：利用病毒和植物细胞对高温忍耐性不同，选择适当的高温处理染病植株，使植株体内的病毒部分或全部失活，而植株本身仍然存活。 10、玻璃化现象：在长期的离体培养繁殖时，有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水渍状，这种现象称为玻璃化。 3、平板培养法：是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。 4、消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。 A.简述无菌操作的技术要点。 答：①接种室消毒（接种前紫外灯照射20min,以上，平时或使用前酒精等喷雾灭菌。） ②用品消毒（所用刀，剪，镊子随时用75%酒精浸泡灭菌，接种材料前在酒精灯灼烧灭菌） ③人员消毒（进入实验前用肥皂洗手，穿上灭菌的实验服，操作前操作中常用酒精棉擦手，燥作时不要讲话。） ⑤材料消毒（外植体） A.简述高压灭菌锅的使用方法。 答：①首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅加入与三脚架齐平的水。 ② 放回灭菌桶，并装入灭菌物品。 ③加盖，并将盖上的排气软管插入内层桶的排气槽内，在以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，螺栓松紧一致，勿漏气。 ④打开电源加热，待压力上升到0.5MP时打开气阀，排净锅内冷空气后，待压力降到0MPA时关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力而逐渐上升，当锅内压力上升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。 ⑤灭菌所需时间到后，切断电源，让锅内温度自然下降，当压力下降到零时，打开排气阀，旋松螺木栓，打开锅盖，取出物品。 A.简述大蒜脱毒的方法及原理。 答：原理： ①热处理：在一定范围内，用高于常温处理可部分或完全钝化植物组织中的某些病毒，而不伤害植物本身 ②茎尖培养：由于病毒在植物内分布不均匀，存在于茎尖，茎尖部分病毒含量极低或无病毒，以茎尖组织作为外植体，能获得脱毒植株，供繁殖，生产使用。 方法：茎尖培养结合热处理 将适宜的母株或由块茎萌发的带芽块茎于适当的高温30℃~38℃处理数周后，切取顶芽或侧芽作为茎尖剥离材料于无菌条件下剥离茎尖接种与适宜的培养基上，诱导茎尖分化成苗，扩繁育种。 A.简述植物快繁的技术路线. 消毒 切割茎断 答：芽段——→芽萌发——→→芽生根——→炼苗移栽 A.简述大蒜脱毒的工艺流程 答：选择品种和母株→获取茎段→茎段消毒→剥离茎尖接种→分化成苗→保存无菌试管苗→扩繁 B.组培中外植体污染原因及预防措施。 答：污染途径：1、外植体带菌 2、培养基及接种器具灭菌不彻底 3、接种操作不规范 4.环境不清洁 预防措施：1，防止外植体带菌①：选择好外植体采摘时期和采摘部位。 ②：室外或无菌条件下进行预培养。 ③：外植体严格灭菌。 2，保证培养基及接种器具彻底灭菌。 3，操作人员严格遵守无菌操作规程。 4，保证接种与培养环境清洁。 三、1、简述培养基的配制、分装、包扎和灭菌。 答： （1）确定培养基的配方。 （2）贮备液（或母液）的配制与保存 配一些浓溶液，用时稀释，这种浓溶液叫贮备液或母液。按药品种类和性质分别配制，单项、单独保存或几种混合保存。一般应按配方顺序依次称量，分别溶解在少量蒸馏水中，最后再依次加到一起，并定容到规定体积。贮备液配好后贴上标签，保存在冰箱中。 （3）配制培养基 ●先在洁净的不锈钢锅理放入约750ml蒸馏水，加入所需要的琼脂和糖，最好能在水浴锅理将琼脂溶化，如直接加热应不停地搅拌，防止在锅底烧焦或沸腾溢出。 ●按需要加入相应量的母液。 ●按需要加入相应量的植物激素和其它物质。加蒸馏水定容， ●充分混合好后，用1NKOH（或NaOH）调整PH值到所需值。 （4）分装：按容器的大小和培养要求，趁热将适量培养基分注到三角瓶或试管中，并即刻用封口膜封住瓶口。 （