microRNA 1, 133, 206在鼠肌肉中的表达谱英文电子书.pdf

· 38 · 生物技术 中国畜牧兽 医 2009年第 36卷第 8期 microRNA一1，一133，一206在 鼠肌 肉中的表达谱 田明 -一，费菁 ，胡晓湘 ，李宁 ，刘娣 ，孟庆勇 (1．东北农业大学动物科学技术学院，哈尔滨 150030 2．中国农业大学生物学 院农业生物技术 国家重点实验室 ，北京 100193) 摘要 ：MicroRNAs(miRNAs)是一类重要 的调节基 因转录的非编码小 RNA。其 中miR-1、miR--133、miR一206是肌 肉特异 表达 的mieroRNA，同属 miR-1家族 。它们在胚胎发育时期的表达及作用 已有很多文章阐述 ，但很少有文章详细分析它们在 成体 中的表达 。为检测这 3类 microRNA的表达差异 ，选择 BAIB／c品系小 鼠的股二头肌 ，提取 RNA。设计 microRNA专用 的茎环状引物 ，通过实时定量 PCR，检验 miR-1、miR一133、miR一206和 miR一181a在骨骼肌组织 中的表达情况 。结果发现 ，miR一 133的表达量要 明显高于miR一1和 miR一206，miR-1略高于 miR-206的表达量 ，作为对照，miR181a的表达量非常微小 。分析 该现象 ，根据资料和网络软件预测 ，绘制这 3类 microRNA对肌肉生长发育作用 的关系图，初步解释各种 microRNA之 间呈现 表达差异的原因。为下一步研究成体 中microRNA及其靶位点提供依据和方 向。 关键词 ：miRNA；Real—timePCR；表达谱 中图分类号 ：Q78 文献标识码 ：A 文章编号 ：1671-7236(2009)08—0038—04 miRNA是一类具有高度保守性的非编码基 因 microRNA与肌肉发育 的关系 ，能够为下一步研究 家族 ，发挥重要的调控作用 。miRNA 在动物 中的 在成体肌 肉组织 中肌 肉特异性 microRNA 与各类 靶基因一般以发育基因为主(李继霞等 ，2003)，如哺 生长因子的关系做好铺垫 。 乳动物脑发育阶段 ，20VomiRNA 表达发生显著变 1 材料与方法 化；肌肉发育方面，Texel绵羊 中GDF8基 因的 3 1．1 组织样品 BALB／c品系小 鼠20周龄 (编号 UTR 内一个点突变产生一个 可令 miR一1、miR一206 1、2、3)后腿股二头肌 。 同时作用的靶位点 ，引起 miRNA 介导的肌 肉生长 1．2 试剂 Trizol总 RNA提取试剂盒购 自Tian— 抑制素基因(myostatin，MsTN)浓度在转录后 降低 gen公司，M—MLV 反转 录酶购 自Tiangen公 司， 而造成肌 肉肥大 (Clop等 ，2006)；miR一1通过作用 TaqDNA 聚合酶购 自北京 Promega公司，SYBR 于 HDAC4而促进成 肌细胞分化 为成熟 的肌 肉细 GreenPCRKit购 自Sigma公司。 胞 ，抑制细胞扩增 。miR一133通过抑制 SRF而促进 1．3 仪 器 引物设计软件 Primer5．0，电泳仪 成肌细胞扩增 ，抑制分化 (Chen等，2006)。 目前研 (BIO—RAD)，Real—timePCR仪 (ABIAppliedBio— 究内容多是 microRNA 在个体胚胎发育早期针对 systems)，PCR仪 。 不同靶基因发挥作用，到成体时表达降低。但肌 肉 1．4 RNA提取 用TrizolTotalRNAReagent分 细胞在成体中还存在着肌纤维长度的增加和周径的 别提取 鼠(编号 1、2、3)组织样 品的 RNA，并进行凝 增大现象 ，肌 肉特异性表达 的microRNA，如 miR- 胶 电泳检测 RNA质量 。 1、miR一133、miR一206在成体 中的表达情况值得关