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分光光度法测定茯苓中多糖总糖含量 分光光度法测定茯苓中多糖总糖含量 更新日期：2011-09-20 丰朝霞　张鸿 摘　要：为测定茯苓提取液中的多糖、总糖含量，以苯酚-硫酸法，制得有色的糖醛衍生物，用分光光度法进行含量测定，在波长490 nm 处测定吸收度，得回归方程A=-0.128+0.109 8X，γ=0.999 0，线性关系好；回收实验，平均回收率为99.5%。n=5。方法简便易行，稳定，快捷，重现性好。 关键词：茯苓；多糖；总糖；含量测定 分类号：R284.2　文献标识码：A 文章编号：1008-0805(2000)02-0109-01▲ 　　茯苓中医用于治疗水肿尿少、脾虚食少、心神不安，失眠等症状，具有健脾宁心，利水渗湿等功效。主要含有β-茯苓聚糖(β-Puchyman)即茯苓多糖、茯苓糖〔Pachymose(C10H24O14)〕、三萜类化合物茯苓酸(Tumulasie acid)、松苓酸(Pmicoic acid)，此外尚含有组氨酸、胆碱、葡萄糖等其他成分［1，2，3］，其主要药理活性成分，具有抗肿瘤，提高免疫功能的作用。 　　《中国药典》1995年版Ⅰ部等有关资料，均未对茯苓多糖进行定量检验。为了确定茯苓总糖、多糖的含量，本实验利用苯酚-硫酸法制得的醛糖衍生物，采用分光光度法对茯苓多糖进行含量测定。 1　仪器和试药 1.1　仪器：TU-1221型分光光度计(北京应用仪器厂)，80-1离心机(上海手术机械厂)。 1.2　试药：茯苓(由湖北省药材公司购得)，苯酚、乙醇、硫酸均为AR级。 1.3　苯酚试剂的配制：称取苯酚4 g，加水100 ml使溶解，至棕色瓶中，得浓度为4%苯酚试液。 2　实验方法 2.1　粗糖的提取：精密称取本品细粉5 g，置圆底烧瓶内，加水100 ml，回流提取2 h，乘热过滤，重复提取2次，用少量水洗渣，滤过与上液合并，浓缩，转移至100 ml容量瓶内，加水稀释至刻度，即得。 2.2　供试液的制备 2.2.1　多糖：照2.1项下操作，取上稀释液2 ml置离心器中，加80%乙醇10 ml离心，2 500 r/min，30 min后取出倾去上清液，将沉淀移至50 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取上液1 ml加1 ml 水于具塞试管中，加4%苯酚1.0 ml，混匀，迅速加入浓 H2SO4 7.0 ml，摇匀，于40℃水浴中保温30 min后移至冰水浴中，放置30 min后取出。 2.2.2　总糖：按2.1项下操作，取稀释液3.0 ml至100 ml容量瓶中，加水至刻度。精密量取该溶液2 ml置具塞试管中，自加4%苯酚1.0 ml起依次操作。 2.3　测定条件的选择 2.3.1　测定波长的选择：按2.2.1方法操作。对照液为：取2 ml水于具塞试管中，自加4%苯酚起，依法操作，从440～510 mm 处进行吸收度测定，结果见表1。 表1　最大吸收度的选择 波长 λ/nm 吸收度 A 样品 波长 λ/nm 吸收度 A 样品 510 0.170 470 0.327 500 0.320 460 0.242 490 0.438 450 0.186 480 0.417 440 0.115 　　在490 nm 处测得有最大吸收，故选择490 nm 为测定波长。 2.3.2　标准曲线的测定：精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖60 mg，置100 ml 量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度(每1 ml中含无水葡萄糖0.6 mg)。精密吸取该溶液0.0，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml分别置50 ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密吸取上述各浓度的标准溶液2 ml，于具塞试管中。照2.2.1项下自加苯酚起依次操作，以第1份为空白，在490 nm 处测定吸收度，见表2。 表2　标准曲线的测定结果 浓度 C/μg.ml-1 吸收度 A对照品 浓度 C/μg.ml-1 吸收度 A对照品 20.48 0.091 0 81.92 0.423 2 40.96 0.221 8 102.40 0.529 0 61.44 0.331 3 122.88 0.652 9 　　回归方程A=-0.012 8+0.109 8X，γ=0.999 0 　　实验表明无水葡萄糖在20.48～122.88 μg之间符合 Beer 定律，呈良好的线性关系。 2.3.3　稳定性实验：取2.3.1方法操作，每隔40 min 测定吸收度，结果表明，供试液在3 h 内显色稳定，见表3。 表3　稳定性实验　　　n=5 时间 T/min 对照品吸收度 A对 供试品吸收度 A供 RSD(%) 0 0.334 6 0.221 8 　 40 0.335 4