第二章：免疫分析法.ppt

第二章 免疫分析法;免疫分析是指利用抗原与抗体之间高特异 性的反应（即免疫反应）实现对抗体、抗 原或相关物质进行检测的方法。 免疫分析实际上是一种特殊的试剂分析， 抗体成为分析试剂。;第二章 免疫分析法（Immunoassay）;第一节 免疫学基础;一、抗 原（Antigen，Ag）;抗原的两种基本特性： 1、免疫原性(immunogenecity)： ? 指抗原分子能够刺激机体产生免疫应答(产生特 异性抗体及免疫效应细胞)的性质。 ? 诱导免疫应答过程----简单讲：刺激诱导机体产 生抗体。; 完全抗原（complete antigen)： 具有免疫原性和抗原性的物质，如：蛋白质、 细菌、病毒等。 半抗原（hapten，又称不完全抗原incomplete antigen ）： 无免疫原性，只有抗原性的物质，多为分子量较 小的有机物，如：二硝基苯酚（DNP）。 只具有免疫反应性而不具免疫原性的物质。 ; 半抗原（hapten）： 无免疫原性，有免疫反应性，单独半抗原， 多为小分子物质。 无免疫原性的解决方法：大分子载体与半抗 原结合，形成半抗原-载体复合物，半抗原 成为大分子上新的表位，诱导免疫反应，产生抗半抗原抗体。;载体（carrier）： 赋予半抗原以免疫原性的蛋白质。 半抗原 + 蛋白质 ? 完全抗原 ? 结合到大分子载体上以后，半抗原可以改变载体 原有的表位，也可以形成新的表位。 ? 半抗原在表位中是关键性的基团。抗原特异性的 研究多是通过半抗原－载体复合物来进行的。 ;半抗原 ;载体;（一） 抗原的免疫原性;? 抗原的免疫原性，首先决定于其自身的化 学特性； ? 但同一种抗原，对不同种动物或同种动物 不同个体间其免疫原性强弱，可表现很大差 异； ? 因此一种抗原的免疫原性是由其化学性质和 宿主因素决定的。 具有免疫原性的物质称为（免疫原） （immunogen） ;1、免疫原性的化学基础;蛋白质： A. 氨基酸组成 --- 含芳香族氨基酸 （特别是酪氨酸），免疫原性强。 B. 结构：环状，免疫原性强；直链，免疫原性弱。 多糖：具有免疫原性, 较蛋白质弱。 核酸：多无免疫原性。;2）分子量;? 可见免疫原性除与分子量有关外，还与 其化学结构相关。 ? 多肽类激素如胰岛素虽为小分子量(6000) 亦具有免疫原性。来自一种动物的胰岛 素，如长期用于另一种动物，亦能诱导免 疫应答产生抗体。 ;3）化学结构 ;2、宿主因素;1）异物性 ? 异物即非已物质; ? 异物性是抗原的核心，与机体亲缘关系越 远，组织结构的差异越大，异物性越强。;2）宿主遗传性 ;3）免疫方式 包括抗原进入的途径、剂量、次数和间隔 时间以及免疫佐剂的使用等因素也可影响 免疫应答。 ;A、免疫原的剂量及进入途径： 剂量： ①剂量不足或过多均不引起免疫应答。 ②重复进入，引起强免疫应答。 途径：皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔。;B、免疫佐剂（adjuvant )： 定义：先于抗原或同时与抗原混合注射机 体可增强抗原的免疫原性的物质。 应用：a. 弱免疫原性物质 b. 免疫原剂量不足 ;佐剂种类： ① 油性乳剂—弗氏佐剂(Freund adjuvant) ② 无机化合物 ③ 微生物及其产物 ④ 脂质体;佐剂的作用机制:;　 抗原递呈（antigenpresentation）是辅佐 细胞向辅助性T细胞展示抗原和MHCⅡ类 分子的复合物，并使之与T cell receptors (TCR)结合的过程。;（二）抗原性 自发现抗体后，用血清学方法在体外实验， 证明了天然抗原与其相应抗体发生特异性 结合，这是一个重要的免疫学现象，称这 种特性为抗原的抗原性。 ; 1、抗原决定簇又称表位 (epitope)： ① 定义：抗原物质中能与其相应抗体或致敏淋巴细胞 发生特异性结合的结构(免疫应答的特异性基础)。 ? 抗原分子中特征结合区域； ? 被淋巴细胞识别，诱导免疫应答； ? 被抗体分子识别，发生抗原-抗体结合反应。 并非整个分子都起特征选择作用 ;②大小: 表位：数个氨基酸残基组成特征结构； 5～7个氨基酸，不超过20个； 尺度：3×1.5×0.7