第八章 血清酶活性测定.ppt

* * 第八章 血清酶活性测定 第一节 概述 血浆特异酶：在血浆中发挥特定的催化作用的酶。为血浆蛋白的固有成分，含量高于其他组织，与凝血有关的酶或酶原、拟胆碱酯酶、脂蛋白脂肪酶及肾素等。 外分泌酶：由外分泌腺合成并分泌进入血浆的酶。如：淀粉酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶 细胞内酶：存在于细胞内进行物质代谢的酶，随着细胞的不断更新或破坏可少量释入血液，细胞内外浓度差异悬殊，当其大量出现于血清中时，提示酶的来源组织细胞受损，最常用于临床诊断。 一、血清酶的来源 二、酶活性测定在临床诊断中的应用 （一）在诊断肝胆疾病中的应用 反映肝细胞实质病变：ALT 、AST 反映肝细胞合成功能：ChE 、LCAT （二）在诊断急性心肌梗死中的应用 CK-MB ，LDH1 ，AST （三）在诊断急性胰腺炎中的应用 ALP(碱性磷酸酶） （四）在诊断骨骼疾病中的应用 AMS（淀粉酶），LPS（脂肪酶） （五）在诊断前列腺疾病中的应用 同工酶 （六）在诊断肿瘤中的应用 ACP（酸性磷酸酶） 第二节 血清氨基转移酶活性测定 氨基转移酶又称转氨酶，在机体内多达60余种，广泛存在于肝脏、心肌、骨骼肌、肾、脑、胰、肺、白细胞、红细胞中。 其中以丙氨酸氨基转移酶(ALT或GPT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST或GOT)两种最为重要，它们催化机体内氨基酸的转氨基反应： ALT L-丙氨酸 + α-酮戊二酸 ? 丙酮酸 + L-谷氨酸 AST L-天门冬氨酸 + α-酮戊二酸 ? 草酰乙酸 + L-谷氨酸 A-NH2+B A+B-NH2 转氨酶 （一）定时比色法（两点法） 国内采用的比色测定法有三种： 赖氏法（30min） 金氏法（60min） 改良穆氏法（30min） 三种方法的原理、试剂、操作步骤和酶作用温度 都相似，单位定义和标准曲线绘制方法有差异。 血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性测定 赖氏比色法 原理： 选择在500-520nm处检测，丙酮酸苯腙的显色强度约为α-酮戊二酸苯腙的3倍 必须降低底物α-酮戊二酸及2,4-二硝基苯肼的浓度 ALT测定不是 在最佳条件下进行，反应中丙酮酸生成量与ALT活性不能呈现良好的线性关系 (这是赖氏法的最大缺陷)，其标准曲线不呈直线而为抛物线。 2,4-二硝基苯肼 丙酮酸苯腙 (在碱性条件下呈红棕色) α-酮戊二酸苯腙 (在碱性条件下呈红棕色) 丙氨酸 +α-酮戊二酸 丙酮酸 + 谷氨酸 ALT 37°pH7.4 [测定方法] 二、速率法（连续监测法 ） 原理 NADH在340nm处有特征吸收峰，连续监测NADH消耗引起的340nm吸光度变化,根据340nm处吸光度下降速率（－△A/min）计算ALT活性 参考方法 1. 该ALT测定法中存在两个消耗NADH的副反应 评价 双试剂法：血清与缺少α-酮戊二酸的底物溶液混合，37℃保温5min，使样品中所含内源性α-酮酸（如丙酮酸）引起的副反应进行完毕。然后，加入α-酮戊二酸启动ALT的催化反应，在波长340nm处连续监测吸光度下降速率。根据线性反应期吸光度下降速率(-△A／min)，计算出ALT活力单位。（ALT测定的首选方法） 血清中存在的游离α-酮酸（如丙酮酸）和增多的谷氨酸脱氢酶（GLDH）能消耗NADH，使测定值偏高。 2.在IFCC推荐的试剂盒中含有P5P，这是转氨酶的辅基，能使血清中ALT发挥最大活性。 * * * 血清