第四章 抗体制药-1.ppt

抗体制药 Biotechnological Pharmaceutics 1 2 3 4 m m m m 1 2 3 4 1 2 3 4 单抗 细胞融合 取出脾细胞 + 癌细胞 各抗体分开 Turn 20 抗体 -a -b -c -d -a -b -c -d 抗原决定基 BALB/c a b b c d 传统抗体(抗血清)是所有抗体的混和 脾脏产生各种 B 细胞 免疫前要先把抗原作成乳剂 免疫 抗原 采血后可得传统抗血清 已建立之小鼠 骨髓癌细胞株 由脾脏收集 B 细胞 抗原通常有多个抗原决定基 免疫后 的脾脏 约在两月内 注射五到八次 Ag X -d 细胞融合 -a -b -c -d Ag X Ag X’ ELISA HAT PEG Cell fusion Hybridoma cells 融合瘤细胞 （Subcloning） (确定只有一种细胞) d’ d a b c d a b c d’ + + + + + + + - X -d -c -b -a + - -d NS-1 骨 髓 癌 细 胞 B cell 脾 细 胞 分株培养筛选 筛选 单抗 传统抗体 (抗血清) 试验专一性 对 抗 原 的 反 应 无 法 分 辨 完 全 不 同 d 旧有抗原 d’ 新的抗原 第三节 基因工程抗体 Genetic Engineering Antibody McAb具有高度特异性、均一性、又有来源稳定可大量生产等特点，促进了基础医学和临床医学等众多学科的发展。 存在的缺陷， McAb均是鼠源性抗体，应用于人体内有排斥反应；完整抗体分子的相对分子量过大，难以穿透肿瘤组织，达不到有效的治疗浓度。 降低McAb的免疫原性；降低McAb的相对分子量。 对鼠源性的McAb进行基因加工和改造 目的：降低免疫源性；降低相对分子量 方式： 一、人-鼠嵌合抗体 二、改形抗体 三、Fab与Fv抗体 四、scFv 五、单域抗体和分子识别单位 一、人-鼠嵌合抗体 Chimeric Antibodies 人一鼠嵌合抗体是将鼠源单抗的可变区与人抗体的恒定区融合而得到的抗体。 Biotechnological Pharmaceutics 抗 体 制 药(一) 本章目的要求 1、掌握单克隆抗体的概念。 2、理解制备单克隆抗体的一般流程。 3、理解基因工程抗体的制备。 4、理解噬菌体抗体库的基本方法、技术特点及基因工程抗体的表达。 5、掌握抗体诊断试剂的分类。 学习内容（一） 1、抗体制药概述 2、单克隆抗体制备的基本过程。 3、基因工程抗体。 第一节 概 述 ?1890年Behring和北里柴三郎发现白喉抗毒素,建立了血清疗法,开创了抗体制药。 ? 1937年Tiselius用电泳法将血清蛋白分离为白蛋白、α、β、γ球蛋白，并证明抗体活性主要存在于γ球蛋白组分。 ?70年代中期，日本利根川进证实了Ig的基因结构，获得1987年的the Nobel prize。 抗体？ 是指能与相应抗原特异性结合具有免疫功能的球蛋白。 抗体的产生？ 机体免疫系统受抗原刺激后，B淋巴细胞被活化增殖和分化为浆细胞，由浆细胞合成和分泌的球蛋白。 多克隆抗体 polyclonal antibody 指由不同B细胞克隆产生的针对抗原物质中多种抗原决定簇的多种抗体混合物。如:免疫血清（含多种特异性抗体）。 实际意义： （1）预防、治疗感染性疾病， 如：破伤风抗毒素血清 ? 抗破伤风， 副作用：?超敏反应 （2）临床诊断， 如：肥达氏反应 -- 伤寒、副伤寒 缺点：特异性差。 传统抗血清 抗 原 免 疫 所有抗体混合 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 脾 脏 淋巴結 B 细胞 单克隆抗体 monoclonal antibody，McAb 1975年Kohler和Milstein首先利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体。 单克隆抗体具有高度特异性、均一性、来源稳定、可大量生产等特点，为抗体制备和应用提供了全新的手段，还促进了基础和临床医学的发展。 第二节 McAb及制备 一、 McAb 1、McAb定义 是由一个杂交瘤细胞及其后代所产生的针对一个抗原决定簇的高度特异性和专一性的抗体。 2、McAb怎样产生？ 是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的。 二、McAb的制备 1、抗原与动物免疫 制备特定抗原