11遗传性疾病的分子诊断.ppt

α地中海贫血 1. α地中海贫血遗传特征 （1）由于基因缺失导致的α地中海贫血基因型 表 型 基因型 正常人 αα/αα α地中海贫血Ⅱ（静止型） α -/αα α地中海贫血Ⅰ（标准型） - -/αα Hb H病（β4） α- / - - Hb Bart’s（胎儿水肿综合症，γ4） - -/ - - （2）由于以下基因突变导致α地中海贫血 ①点突变 ②移码突变 ③无义突变 ④mRNA加尾信号突变 ⑤终止密码子突变 2.分子诊断方法 （1）PCR法 扩增产物194bp：Bart’s水肿胎儿； 扩增产物194bp和287bp：HbH病或α地中海贫血Ⅰ； 扩增产物287bp：正常人或α地中海贫血Ⅱ 。 （2）Southern印迹法 α地中海贫血的基因簇限制性酶切片段长度 α基因探针 ζ基因探针 Bam HⅠ Eco RⅠ Hind Ⅲ EcoRⅠ aa/aa 14 23 16.5，13 23，5 --/-- - - 20，13 17，5 -a3.7/aa 10.3 19.3 ND ND -a4.2/aa 9.8 18.8 ND ND β地中海贫血 1.遗传特征：突变是β地中海贫血的主要发病原因。如果突变发生在β基因的启动子区域则转录的β链mRNA水平下降；如果突变发生在剪接信号附近则导致异常的剪接；如果在结构基因中发生突变，导致β珠蛋白链的合成量减少、根本没有或产生异常的β珠蛋白链。 （1）重型β珠蛋白生成障碍性贫血，又称为β0珠蛋白生成障碍性贫血，基因型为纯合子β地/β地，两个β基因都发生突变，使其不能合成正常的β珠蛋白，没有血红蛋白A的合成，患者几乎靠输血维持生命。 （2）β珠蛋白生成障碍性贫血，又称为β+ 珠蛋白生成障碍性贫血，其基因型为杂合子 β地/β，其中一个基因正常，贫血症状较轻。 β地中海贫血常见突变位点 2．分子诊断方法 PCR和基因点突变检测技术是β地中海贫血基因诊断的主要手段，常用的方法有： （1）PCR-RDB法(反向斑点杂交)： 先将探针固定在尼龙膜上，再将待测的DNA样本(一般是经PCR扩增的产物)与之杂交，一次就可以判断某一基因的各种突变情况。 扩增的引物为： Bio-C1：5′-GTACGGCTGTCATCACTTAGACTTCA-3′ Bio-C2：5′-TGCAGCTTGTCACAGTGCAGCTCACT-3′ Bio-C3：5′-GTGTACACATATTGACCAAA-3′ Bio-C4：5′-AGCACACAGACCAGCACGTT-3′ 中国人中已发现有21种β珠蛋白基因的突变型，使用固化在膜上的11种探针可以检测出98%以上的中国人β地中海贫血突变基因型。 402bp 423bp （2）PCR-ASO法： 当基因的突变情况完全明了时，可以合成等位基因特异的寡核苷酸探针（allele-specific oligonucleotide,ASO），长度通常为20bp左右。一种探针与正常基因杂交，另一种探针与突变基因杂交，即将突变的基因区别开来. PCR先将含有突变点的基因进行扩增，然后再与ASO探针作点杂交。优点是灵敏、难确，缺点是一次杂交只能检测一种突变。 （3）等位基因特异性PCR（ASPCR）:  AAATAAAGGC 产物 AAAAAAAGGC 产物 TTTTTTT TTTATTT 正常引物 突变引物 PCR PCR 无突变 突变 杂合子 （4）芯片技术 多采用PCR体外扩增结合DNA芯片反向点杂交检测技术，可快速准确检测人临床