凋亡素体外抗膀胱癌效应观察及应用前景分析.pdf

·150· 中国肿瘤临床 2009年第36卷第3期 · · 基础研究 凋亡素体外抗膀胱癌效应观察及应用前景分析* 詹 辉 王剑松 王春晖 袁顺辉 左毅刚 柯昌兴 丁明霞 颜汝平 王 伟 刘靖宇 徐鸿毅 昆明医学院第二附属医院泌尿外科 云南省泌尿外科研究所（昆明市 650101） 摘要 目的：观察凋亡素诱导不同膀胱癌细胞株凋亡的效果并结合文献评价其临床应用前景。方法：采用凋 亡素原核表达载体pBV220/Apoptin、真核表达载体PCDNA3、人膀胱移行细胞癌细胞株BIU－87及EJ、RT-PCR试剂 盒以及质粒提取试剂盒。将原核表达载体中的Apoptin基因克隆入真核表达载体PCDNA3，经双酶切及基因测序鉴 定无误后，利用脂质体转染法将真核表达质粒PCDNA3/Apoptin转染膀胱癌细胞株BIU－87及EJ。然后于转染后 24h利用RT-PCR观察基因表达情况，并分别于转染后24、48、72h利用透射电镜检测肿瘤细胞超微结构变化、MTT 法检测细胞存活率、流式细胞仪TUNAL法检测各组细胞的凋亡率，并对结果行统计学分析。 成功构建真核表 结果： 达载体PCDNA3/Apoptin并转染膀胱癌细胞株BIU－87及EJ。转染24h后，通过RT-PCR法可见凋亡素基因在细胞 内表达，并于转染后不同时段观察到实验组细胞发生高效凋亡，并随时间的延长而逐步升高，转染后72h，两种细胞 株的凋亡率约为65%，而MTT法所测细胞存活率约为25%，与对照组相比，差异有统计学意义（P0.05）。同时通过 透射电镜可观察到实验组多数细胞出现凋亡的超微结构变化，如核边集、核碎裂及凋亡小体等。结论：凋亡素可诱 导不同的膀胱癌细胞株发生高效的凋亡。考虑到其具有与小分子化疗药物不同的作用机制，我们认为凋亡素有可 能成为克服膀胱癌细胞多药耐药性的新途径之一。 关键词 凋亡素 膀胱肿瘤 移行细胞癌 凋亡 治疗 doi:10.3969/j.issn.1000-8179.2009.03.010 In Vitro Research of the Anti-cancer Effect of Apoptin and Its Clinical Prospect ZHAN Hui, WANG Jiansong, WANG Chunhui, YUAN Shunhui, ZUO Yigang, KE Changxing, DING Mingxia, YAN Ruping, WANG Wei, LIU Jingyu, XU Hongyi Corresponding author: WANG Jiansong, E-mail: jiansongwang@ Department of Urology, The Second Affiliated Hospital of Kunming Medical College, Kunming 650101, China Grant support: National Natural Science Foundation of China Abstract Objective: To observe the anti-tumor effect of Apoptin on different bladder cancer cell lines and to evaluate the prospect of this protein in anti-bladder cancer therapy. Methods: The prokary