一、细菌的形态学检查.ppt

* 目 录 末页 * 《医学微生物学》实验一 右江医学院微生物学与免疫学教研室 一、严格遵守实验室规则，严格执行无菌操作。 二、实验前做好预习，做到心中有数。 三、示教的实验要仔细观察，联系有关理论积极思考。 　四、认真分析实验结果，探讨实验原理，得出可能的结论。若实验结果与理论不符合时，要加以分析讨论，以逐步提高自己的科学思维能力。 　五、实验课后，须按时按要求递交实验报告。 　六、防止发生各种事故。 医学微生物学实验课的要求 　一、爱护公物，节约使用实验材料。 　二、进入实验室必须穿实验服，必要的文具应放在抽屉里，个人物品如书包、衣物等一律不得带入实验室。 三、用过的滴管、玻片等带菌器材，应放在指定的地方，不得将带菌液体倾入水槽。 四、若发生割破手指、菌液进入眼等事故时，应立即报告老师，及时进行预防处理。 医学微生物学实验室规则 　五、实验完毕，应清理桌面，把用过的物品放回原处（如显微镜、接种环、染色液等），需培养物品按要求放温箱。 六、离开实验室前，用消毒液将手浸泡5～10分钟，并用自来水冲洗干净后，方可离室。 七、值日生负责整理清洁实验室，关好水、电、门、窗。 八、未经许可，不得将实验室内任何物品（特别是菌种）带出室外。 医学微生物学实验室规则 实验报告书写 1.实验题目 2.实验目的 3.实验原理 4.实验材料 5.实验方法 6.实验结果 7.结果分析 8. 实验意义 [实验内容] 一、光学显微镜油镜的使用和保护法 二、细菌的革兰染色检查法 三、细菌基本形态和特殊结构的观察 实验一 细菌的形态学检查 实验一 细菌的形态学检查 [目的要求] 1.掌握显微镜油镜的使用和保护。 2.掌握细菌的基本形态和特殊结构。 3.掌握细菌涂片标本的制备及革兰染色的步骤，判断革兰染色性及明确其临床意义。 一、显微镜油镜的使用和保护 显微镜的构造图 显微镜的使用方法 油镜头的辨认 显微镜的维护 油镜加香柏油的原理 玻璃折射率： n=1.52 香柏油折射率： n=1.515 二、细菌标本染色检查法 细菌个体微小，无色半透明，染色后能在显微镜下识别其各种不同结构，并鉴别细菌。 细菌染色法: 细菌特殊染色法 芽胞 鞭毛 丹麦细菌学家Gram于1884年发明的一种鉴别细菌的染色法。 可将细菌鉴别为革兰氏阳性G+菌和革兰氏阴性G-菌两大类。 革兰染色法 1.通透性学说 革兰氏阳性菌细胞壁的通透性比阴性菌低，进入细胞的染料和碘液结合生成沉淀，脱色剂较易通过革兰氏阴性菌的细胞膜，将碘和染料的复合物溶解洗出，故易脱色；阳性菌细胞膜透通性低，故不易脱色。 革兰染色法原理 革兰染色法原理 2.等电点学说 革兰阳性菌等电点（PI2~3）比革兰阴性菌的等电点（PI4~5）低。在同一PH条件下，阳性菌比阴性菌所带负电荷要多，与带正电荷的碱性染料结合力较牢固，不易脱色。 动画演示 3.化学学说 革兰氏阳性菌细胞内含有某种特殊化学成份，一般认为是核糖核酸镁盐与多糖的复合物，它能和料染一煤染剂复合物相互结合，使已着色的细菌不易脱色。 革兰染色法原理 (一）实验材料 1.菌种 培养18~24h的葡萄球菌、大肠杆菌 及白色念珠菌。 2.试剂 生理盐水、革兰氏染色液。 3.仪器及用具 接种环、酒精灯、玻片、显微镜、香柏油等。 细菌的革兰染色法 制备涂片包括涂片、干燥、固定三步。 涂片 干燥 固定 （二）细菌涂片标本的制备 ① 接种环置于酒精灯的外焰中烧灼灭菌。 （二）细菌涂片标本的制备 1.涂片 ② 取1~2环生理盐水（NS)置于载玻片上，接种环用火焰烧灼灭菌。 1.涂片 （二）细菌涂片标本的制备 ③ 小指和手掌小鱼肌侧拔掉棉塞，并烧灼试管口灭菌。用已灭菌冷却的接种环伸入试管中取适量菌，注意勿使沾有菌液的接种环触及试管壁及试管口。 1.涂片 （二）细菌涂片标本的制备 ④再次灭菌试管口，棉塞略加烧灼放回原处。 ⑤将接种环上之菌涂于载玻片的NS上，制成的菌膜直径约1cm左右均匀薄层。 ⑥接种环用火焰烧灼灭菌放回原处。 注：取菌量不应过多，以免造成菌体重叠。 1.涂片 （二）细菌涂片标本的制备 2.干燥 ①室温中自然干燥。 ②加速干燥，将标本离火焰半尺高处略烘。 （二）细菌涂片标本的制备 3.固定 目的：使细菌蛋白变性，菌体牢固黏附于玻片上，还可杀死细菌。 玻片有菌膜一面向上，在火焰的外焰钟摆样速度通过三次，时间约3秒钟。 （二）细菌涂片标本的制备 初染（结晶紫.碳酸钠） 媒染（ 碘 液） 脱色（丙酮酒精） 复染（ 复红） 革兰染色法操作步骤： 初染 媒染 脱色 复染