产α-淀粉酶菌株产酶培养基组成优化正交试验.ppt

pH值在摇瓶发酵中的作用 一般情况下（实验室），只能做到起始pH的调整； 试验过程中的pH控制很难进行或精确控制； 培养基经过灭菌后，有时会有一定变化（一般会变低）； 所以试验设置pH作为因素，可能在摇瓶发酵培养中达不到相应的目的。 初次进行正交试验时的要求 设计可以先粗放一些，后面的工作可以越来越细；先找出影响大的因素，再进行细致研究；影响不大在后续试验中不再考虑（需要注意因素之间的交互作用）； 水平设置可以把梯度拉大（生物的适应是有一定容度的），这样可以使结果更加明显（直接可以把相关因素的水平设置为“0”）。 装液量作为因素时的要求 装液量的多少可以改变培养基溶解氧的多少（非定量的间接反映）； 一般请用500ml三角瓶，这样可以很好的进行设置； 需要考虑培养过程中的蒸发量损耗。 温度设定及摇瓶转速设定的问题 摇瓶机及摇床的控制精度不够和台套数不足，温度、转速设定不够精确（仪器之间相差较大），可能会带来一些不清楚的影响，建议不要采用。 尽量围绕着培养基的组成来进行开展试验。 试验设计的准备工作 计算所需菌种量（种子培养基的准备）； 正交试验培养基的准备； 配制过程中要细致，不要出错，每组试验一瓶一瓶配制，认真仔细检查，共同的非可变因素可以统一配制后，分别加入； 不要急于实施试验，仔细推敲试验方案； 试验时间，用倒推计算； 试验的基本安排 确定因素、水平，选定L9（34）正交表。 根据正交表安排，配制表中9个试验号的培养基、1个初筛和复筛中使用的培养基（作为对照），共计10种培养基，灭菌后备用。 准备接种用的液体活化菌,提前12-24小时接种培养； 接种：9个试验号培养基、1个对照培养基，共计10瓶，接种量2mL/瓶。 37℃摇瓶培养3天（往复式振荡培养100~120转/分）。 分别测定10组酶活力，结果采用极差分析和方差分析，得出结论。 基本流程 灭菌 确定因素及水平 选择合适正交表 结果分析 配制培养基 37℃摇瓶培养3天 测定酶活力 极差分析 方差分析 因素的主次关系、理论最优组合 液体菌种活化12~14小时 接种2mL/瓶 灭菌备用培养基 保藏斜面菌种 接种1环于活化培养基 方差分析表 各因素水平差异的显著性 完成后结合试验及分析结果进行重复试验 重复试验——结合2种情况安排相关试验 极差分析后得到的理论最优化组合； 理论最优化组合是否出现在所用正交表组合中（实际试验组合中）； ①　出现（说明理论和试验有一定吻合），再找出正交表组合中出现的次优组合，2种组合的培养基各配制2~3瓶； ②　未出现，找出正交表组合中出现的最优组合（试验），和理论最优组合的培养基各配制2~3瓶。 相关培养基灭菌后，冷却后接种液体活化菌种，摇瓶培养3天，测酶活力，结合测定结果进行综合分析判断。 重复试验后发酵液的处理 合并测定酶活力后的发酵液于1个500mL三角瓶（选酶活力高的）； 装入6只100mL带盖离心管中，两两天平称重配平（连盖）； 10000~12000转/分钟离心10min，收集上清液，放入密封容器中（500mL饮料瓶），盖好盖子密封； 放入-20℃冰箱（柜），冻存备用； 用时提前冷水浴溶化。 重复试验后发酵液的处理及酶的粗提取（粗酶粉的制备）流程 酶活力高的发酵液合并 离心（12000转/分钟，10分钟 测定发酵液酶活力 -20℃冷冻保存 收集上清液 用时提前水浴溶化 量取250mL放入1000mL离心瓶中 离心瓶精确称重 加入2倍体积的-20℃预冷无水乙醇（500mL） 混匀后 冷冻离心（4000转/分钟，10分钟） 去上清乙醇混合液（统一收集） 冷冻离心（4000转/分钟，10分钟） 再加入100mL -20℃预冷无水乙醇脱水处理 轻摇后 去上清乙醇液（统一收集） 沉淀室温真空干燥（备用） 留样冻存备以后比较分析 试验的基本安排 一、下周停课，进行必要准备工作： 1、分组自行设计正交试验方案； 2、完成以前实验报告； 3、下周星期一上交正交试验方案及实验报告。 二、试验过程的安排： 1、上课时间准备正交试验用培养基，接种； 2、菌种的活化自己安排好（保证菌种正常）； 3、具体测定时间的安排根据各组的试验方案再定。 SPSS用于正交试验的数据分析 数据的输入及分析准备 启动SPSS，进入变量视图（Variable View），命名相应的变量，并确定小数位数。 点击工作表下方的数据视图（Data View），根据正交表的格式输入相应数据（包括测量数据）。 统计分析步骤 单击菜单中的“分析（Analyze）”，选择“一般线性模型（General Linear Model）”，进一步选择“单变量（Univariate）”； 将“测量值”置入“因变量（Dependent Variable）”框内； 将正交试验设计中涉及的各因素置入“