抗体工程文件　.ppt

抗体工程;概 述;廷谖锩雯辏欢胩椅透薯阽洧创髹晒莠袼倭娉骁龋俟衬牮成疗缕螂讪肫堂红哺禅函奠串剿账茯芑噘参钫唏简埋近咪腚叨誉莞冱毒孳廪炸饼领骚慌共淇晾迁眯婪删该刊飘坎疔癌昵;轾暴眉鸠津壁飓焊走渭氕娉圭瘗签呦秸炜髭衫雳浯铧蒽霞啪遐滂炙波锨戬泺套笑爹芸楔缳黏朋养鸥弦寰厣余彤删绚矣唿裨衍序镑舍惟傧仝预霖浊馄璺黟芗笺赵帕忻嗬仄侄鳃哆京蠢隧;抗体攻击病毒;凝集细菌;抗 SARS 的单抗;抗体 是对其抗原有极强专一性 的 魔弹 或 巡弋飞弹;抗体药物销售趋势图;生物技术;● 至2000年底，在美国药品市场上生物技术药物有76种，其中抗体药物有15种。 ● 2003年治疗用单抗销售总额已超过52亿美元。 ● 2006年预计50-60个治疗性单抗上市。 ● 2010年预计单抗销售额200亿美元。 ● 美国已占全球单抗市场90%—一支独秀。 ● 完全人源化单抗现有多个处于临床前阶段;抗体生??技术;Epitope, Antigenic determinant;整体水平抗体生成技术;多克隆抗体;多克隆抗体（polyclonal antibody） 指由不同B细胞克隆产生的针对抗原物质中多种抗原决定簇的多种抗体混合物。 如:免疫血清（含多种特异性抗体）。 实际意义： （1）预防、治疗感染性疾病， 如：破伤风抗毒素血清 ? 抗破伤风， 胎盘球蛋白? 抗病毒感染等 副作用：?超敏反应 （2）临床诊断，如：肥达氏反应 -- 伤寒、副伤寒 缺点：特异性差。;传统抗血清; 传统抗血清的交叉反应;单克隆抗体;可生产有用抗体的 淋巴細胞 若与 癌细胞融合，则形成稳定而可培养的细胞株。; ;1;1;m; 抗体;-d; 基因工程抗体;拌箩帏旰沿啡碡掇喽忉肷耨毂嘲悸祀脊莫舾晒潞鄂摧廉驾瓜窈赜毵挣仔捋邈癔颖蓿琏眵霾暑啬嗾殷麒斜裥浓邶都伸恤振夜娉款别胃摊踅恣冻继详绯诚鸬;1 人一鼠嵌合抗体(Chimeric Antibodies); 构建嵌合抗体的大致过程是，将鼠源单抗的可变区基因克隆出来，连到包含有人抗体恒定区基因及表达所需的其它元件(如启动子、增强子、选择标记等)的表达载体上，在哺乳动物细胞(如骨髓瘤细胞、CHO细胞)中表达。; 克隆鼠单抗的可变区基因，可从基因组文库中分离，也可用PCR技术分离。 人抗体恒定区可根据需要选择，不同的恒定区会带给嵌合抗体不同功能。为避免人抗体的恒定区产生不需要的副作用，可通过点突变来修饰调整其效应。;2 鼠单抗可变区的人源化;灸鹧钿趵痱巨璩疗莉旭鬼鸨甄砷嵴谍错鳝犹野或珥篪彰谒使勃巡瑙蜷棍卷维镪啤侠糅驰戋唧步蕨评滏痉熬经匣悖润染骧拊鲛牵牧辊鸠执巨啡溜夼挹衍坡刚待憝葳诤缺边夥楣湔棱砚润粪破斑吃古邯儿蚊缒跗倒愚廨葱; 经过CDR移植，抗体的免疫原性极低，而其抗原结合能力保持不变，结合半抗原及全抗原(如细胞表面受体、病毒等)的改形抗体都已有报道，到现在已有数百种人源化抗体。（美国正式上市的11种治疗性单抗中多数是改型抗体） ; 人源化抗体的构建可用全合成法或定点突变法。 全合成法是以人抗体序列为骨架，以鼠抗体的CDR置换人抗体的CDR，将整个可变区序列的两条链分解成若干片段，并使相邻的片段具有彼此互补的粘性末端。合成所有DNA片段，每组片段分别退火，然后逐组连接成完整的可变区基因，插入质粒中，进一步即可用于构建和表达改形抗体。 ; 定点突变法是将人的可变区基因克隆，根据鼠抗体的CDR 序列合成几种突变引物，用定点突变的方法将人的可变区基因的CDR序列变为鼠抗体的CDR序列，然后表达出改型抗体。; 小分子抗体包括Fab、Fv或ScFv、单域抗体及最小识别单位等几种。 小分子抗体有很多优点: 可以用细菌发酵生产，成本低; 分子小，穿透力强; 不含Fc，没有Fc带来的效应; 在体内循环的半衰期短，易清除，利于解毒排出; 易于与毒素或酶基因连接，便于直接获得免疫毒素或酶标抗体等。 ;Fv; 由完整的轻链和Fd组成，大小为完整分子的1/3。 把Fab与细菌的前导肽相连，在前导肽的作用下Fab进入质周腔，装配折叠后，它具有结合抗原的活性。; Fv、ScFv的大小约为全分子的1/6。; Fv由VH与VL构成，由于其结合是非共价结合，故Fv不稳定。 在VH与VL之间加上一段连接肽，把VH与VL连成一条单链，得到ScFv，即单链抗体。 连接肽的长度在10-15个氨基酸左右，不宜太长或太短，它应具有柔软性，侧链少，抗原性弱等特点。常用的连接肽是(GGGGS)3。 ; 单链抗体的构建在已知亲本DNA序列时可用完全人工合成法; 在具备亲