抗体工程制药 研究进展.ppt

抗体的命名原则 过20多年的发展，我国已经初步实现了从基础研究到产业化的跨越，形成北京、上海、西安、广州等抗体药物的中试及产业化基地，各地区各有特点，建立起网状分布格局，体现优势互补。 在产品方面，国家食品药品监督管理局（SFDA）已经批准了13种治疗性单抗药物上市销售，其中有7个是国外进口产品，6个是我国自主研发的，在这些自主研发的产品中有3个是国家生物制品I类新药。 我国2011 年申请临床的抗体类药物的项目有20 多个 。 2011年销售排名前十位的生物药物 正在研发的Biosimilars 抗体药物 可变区（variable region，V区） 轻链和重链中靠近N-端氨基酸序列变化较大的区域 重链和轻链的V区分别称为VH和VL 分别占重链和轻链的1/4和1/2 VH和VL各有3个区域的氨基酸组成和排列顺序高度可变，称为高变区（HVR）或互补决定区（CDR），共同组成Ig的抗原结合部位 在V区中CDR之外的区域氨基酸组成和序列相对不变，称为骨架区（FR） 人－鼠嵌合抗体的构建 可变区（V区）基因克隆 —— 逆转录法 提取杂交瘤细胞的mRNA，逆转录成cDNA 以cDNA为模板，采用特异性引物，PCR扩增VL 和VH 基因 表达载体的构建 将VL 和VH 基因分别连接真核表达系统所需的转录元件 将VL 基因克隆到人IgCL 的基因表达载体上；将VH 基因克隆到人Igg1 的C基因真核表达载体上 将人－鼠嵌合的V-C区基因质粒DNA等量混合，在脂质体介导下共转染骨髓瘤细胞SP2/0 转染后用霉酚酸进行筛选，筛选出形成集落的细胞 人－鼠嵌合抗体的构建 CDR移植抗体 （CDR grafting antibody，改形抗体） 用鼠的CDR替换人Ig中的CDR 设计思路 Ig 分子中参与构成抗原结合部位的区域是VH 和VL 区中的6个CDR区，而非整个可变区 框架区主要起支持CDR的作用，氨基酸组成和立体结构较为保守 抗体中鼠源部分比例很小，基本消除免疫原性 CDR移植抗体的构建 CDR移植抗体的构建原则 在选择骨架区（FR区）时，从已知的人源抗体V区数据库中选择与亲本抗体同源性最高的序列，最大可能地维持原抗体的天然构象，提高CDR移植抗体的亲和性 将FR区内可能影响抗原结合部位的氨基酸残基替换为亲本鼠单抗的氨基酸残基 选择性地保留CDR两侧的FR区序列 抗体V区的N-末端，特别是轻链N-末端的数个氨基酸残基应选择性地一同移植 Fab抗体 包含完整的轻链和一半长度的重链（VH + CH1 + VL + CL） 通过木瓜蛋白酶水解得到，链间含有二硫键 占完整抗体分子大小的1/3，具有一个抗原结合位点 重组Fab抗体 C区改用人源化片段，V区为鼠源性片段 ，降低免疫原性 将两种分泌不同特异性单抗的杂交瘤细胞进行再次融合，产生四源杂交瘤 (quadroma)。但二次杂交瘤细胞株分泌的是两套重链，轻链的随机组合物。BsAb在其中的比例可为10%～50%不等。多倍杂交瘤细胞的稳定性差，BsAb的产量少且活性低，费时费力，临床应用时存在人抗鼠抗体免疫反应 (HAMA)，因此不适用于临床。 含Fc段的抗体融合蛋白—免疫黏附素 Fc的作用：检测、纯化、 延长血清中半寿期 生物学效应功能 目前的客观现实是：研究进展迅速，但未达到常规治疗的应用阶段。 障碍（原因）：抗体相对分子质量大，穿透力低，不能达到靶部位或摄取量低。鼠源性抗体的排斥反应。 常用的抗癌药物：氨甲喋呤（methotrexate,MTX）、阿霉素(adriamycin,ADM) 丝裂霉素(mitomycin,MMC）、环磷酰胺 (cyclophosphamide,CTX) 、新抑癌蛋白(neocarzinostatin, NCS) 、正定霉素(doxorubicin, DOX)等。 小结 杂交瘤单克隆抗体制备技术的原理是利用聚乙二醇作为细胞融合剂，使免疫的小鼠脾细?胞与具有在体外不断繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞融为一?体，在HAT选择性培养基的作用下，只让融合成功的杂交瘤细胞生长，经过反复的免疫学检测筛选和单个细胞培养（克隆化）,最终获得既能产生所需单克隆抗体,又能不断繁殖的杂交瘤?细胞系，将这种细胞扩大培养，接种于小鼠腹腔，在其产生的腹水中即可得到高效价的单克隆抗体。 20世纪80年代诞生了应用DNA重组及蛋白工程技术对编码抗体基因按不同需要进行改造和装配，经导入适当的受体细胞后重新表达的抗体，称为基因工程抗体，它具有如下优点：①通过基因工程技术的改造，可以降低甚至消除人体对抗体的排斥反应；②基因工程抗体的分子量较小，可以部分降低抗体的鼠源性，更有利于穿透血管壁，进入病灶的核心部位；③根