1.支原体的清除PPT.ppt

常智杰;30-50%的细胞培养物中存在支原体污染。;支原体（mycoplasma）：又称霉形体，是目前发现的最小的最简单的细胞，介于病毒和细菌之间。 支原体在自然界的分布非常广泛，种类繁多。 支原体分为两个属：一为支原体属（Mycoplasma），有几十个种；另一为脲原体属(Ureaplasma)，仅有一种。 与人类感染有关的主要是肺炎支原体和解脲脲原体。 与细胞污染有关的支原体则有好多种。 支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。 ;支原体是1898年发现的，其是简单的原核细胞，大小介于细菌和病毒之间。结构比较简单，多数成球形，没有细胞壁，只有三层结构的细胞膜，故具有较大的可变性。 ; 支原体的体形多样，基本为球形，亦可呈球杆状或丝状，其菌落呈针尖大小，故又称之为微小支原体。结构比较简单，没有细胞壁，只有三层结构的细胞膜，故具有较大的可变性。 支原体的大小为0.2～0.3um,可通过滤菌器。革兰氏染色不易着色，故常用Giemsa染色法将其染成淡紫色。细胞膜中胆固醇含量较多，约占36%，对保持细胞膜的完整性具有一定作用。凡能作用于胆固醇的物质（如二性霉素B、皂素等）均可引起支原体膜的破坏而使支原体死亡。 ; 支原体基因组为一环状双链DNA，分子量小，1700kb（仅有大肠杆菌的1/5），500个基因，自我复制，合成与代谢很有限。 在细胞外生殖，采用精氨酸、葡萄糖、脲代谢途径；需要胆固醇、氨基酸、脂肪酸、维生素、其它分解代谢物等；对渗透压不稳定。;　　支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长。用培养基培养时，营养要求比一般细菌高，除基础营养物质外还需加入10～20%人或动物血清以提供支原体所需的胆固醇。最适pH7.8～8.0之间，低于7.0则死亡，但解脲脲原体最适pH6.0～6.5。 　　大多数兼性厌氧，有些菌株在初分离时加入5%CO2生长更好。生长缓慢，在琼脂含量较少的固体培养基上孵育2～3天出现典型的“荷包蛋样”菌落：圆形（直径10～16um），核心部分较厚，向下长入培养基，周边为一层薄的透明颗粒区。 　　繁殖方式多样，主要为二分裂繁殖，还有断裂、分枝、出芽等方式，分裂时二个子细胞大小均匀。另外，支原体分裂和其DNA复制不同步，可形成多核长丝体。 由于没有细胞壁，因此对影响细胞壁合成的抗生素，如青霉素等不敏感，但红霉素、四环素、卡那霉素、链霉素、氯霉素等作用于核蛋白体的抗生素，可抑制或影响支原体的蛋白质合成，有杀伤支原体作用。在培养基中置入脲素并以硫酸锰作指示剂极易与其他支原体作出鉴别。 ;　　一般能分解葡萄糖的支原体则不能利用精氨酸，能利用精氨酸的则不能分解葡萄糖，据此可将支原体分为两类。解脲脲原体不能利用葡萄糖或精氨酸，但可利用尿素作能源。 　　各种支原体都有特异的表面抗原结构，很少有交叉反应，具有型特异性。应用生长抑制试验（Growth inhibition test, GIT）、代谢抑制试验(Metabolic inhibition test, MIT)等可鉴定支原抗原，进行分型。 ;　　支原体对环境渗透压敏感，渗透压的突变可致细胞破裂。对重金属盐、石炭酸、来苏尔和一些表面活性剂较细菌敏感，但对醋酸铊、结晶紫和亚锑酸盐的抵抗力比细菌大。石碳酸，来苏儿易将其杀死。 对影响壁合成的抗生素如青霉素不敏感，但红霉素、四环素、链霉素及氯霉素等作用于支原体核蛋白体的抗生素，可抑制或影响蛋白质合成，有杀灭支原体的作用。 支原体对热抵抗力差，与细菌相似，通常55℃经15分钟处理可使之灭活。 ;　　很多支原体能够致病。 肺炎：肺炎支原体（M. Pneumonia）。 泌尿生殖道感染：人型支原体（M. humenis，MH）、解脲支原体（Ureaplasma urealyticum，UU）和生殖器支原体（M. genitalium，MG）。 关节炎：M. fementans, M. arthritidis 中枢神经：肺炎支原体（M. Pneumonia） 心脏：肺炎支原体（M. Pneumonia）;支原体致病机理;1. 抑制细胞增殖： 50%， 竞争营养，分泌有害代谢产物 迅速降低培养液中葡萄糖，形成酸，改变Ph值； 消耗精氨酸抑制蛋白合成细胞分裂减慢停止生长 2. 改变细胞特性 改变细菌细胞壁的完整性 改变基因表达谱 消耗50%的总蛋白 降低转染效率 产生染色质凝聚 几乎影响宿主细胞所有的功能！！！！！;1. 抑制病毒扩增： 竞争蛋白(50%