大黄酸及大黄素对大鼠腹腔巨噬细胞P2X7通道的影响.pdf

摘要 摘要 近年来，细胞膜上的离子通道越来越受到大家的关注。其中，许多离子通 道在病理学方面起了十分关键的作用，许多“离子通道病”被相继发现。由此，一 些离子通道已经成为了药物研发的靶点。P2X7受体是一种ATP门控的离子通道， 主要在免疫细胞中表达，参与多种免疫反应过程，并可诱发细胞凋亡和坏死。 本文以大鼠腹腔巨噬细胞(PMQ)为研究对象，首先研究了中药大黄的有效成 起的细胞死亡的影响，然后进一步研究了两种药物对P2X，受体的作用，探讨了 药物的作用机制。 本实验利用MTT法检测巨噬细胞死亡。结果表明，胞外高浓度ATP作用 30min可诱导巨噬细胞死亡，且呈剂量依赖性，其中5mMATP诱导死亡率可达 36．3％。而这一现象可以被大黄酸和大黄素所抑制，并且呈现浓度依赖性，其半 实验又利用单细胞钙离子成像分析系统，检测了大黄酸和大黄素对ATP引起的 巨噬细胞【ca2+】i动力学变化的抑制作用。同时，本实验用P2X7受体的特异性激 能诱发正常巨噬细胞[ca2+】i迅速升高；且大黄酸和大黄素X寸[Ca2qj的升高有明显 抑制作用，并且具有剂量依赖性。本实验还利用了P2X7受体的特异性，用倒置 荧光显微镜检测了巨噬细胞对溴化乙锭(EB)摄取程度。发现5mMATP刺激 10min能显著增加巨噬细胞对EB的摄取，即增加了巨噬细胞细胞膜的通透性。 并且大黄酸和大黄素可以剂量依赖性的抑制细胞膜通透性的增强。 以上结果说明，大黄酸和大黄素可以剂量依赖性抑制胞外高浓度ATP引起 的巨噬细胞死亡，并且这一抑制作用是由于二者抑制了细胞膜上的P2X7受体所 致。本研究在一定程度上解释了大黄素和大黄算调节免疫的药物作用机理，为 药物的研发提供了基础。 关键词：巨噬细胞三磷酸腺苷大黄酸大黄素P2X7受体胞内自由钙离 子浓度 Abstract Abstract Theaimofthis isto of and theeffectsemodin study investigate rhein, extractedfronChineseherbda ATP-inducedceil compounds huang，on death， increase ofrat deathwas in【C一]i，andpermeabilizationperitonealmacrophage．Cell determinedMTTmethod．thekineticsofintracellularfreeC一+concentration by a cellweremonitored confocallaser single by (【c一]i)in continuously scanning the membrane wasdemonstratedconfocal microscope，andplasma permeability by microscope． data of The extracellular P2x7 showed，5mM ATP(ATPo，excitomotorreceptor onthesurfaceof deat