甲基对硫磷降解菌DM1的筛选、鉴定及降解性能研讨.pdf

148 农药与环境安全国际会议论文集 甲基对硫磷降解菌DM一1的筛选、 鉴定及降解性能研究 董 明1’2 袁玉兰1 郭新民2 杨 超1 乔传令-* (1中国科学院动物研究所农业虫鼠害综合治理研究国家重点实验室， 北京100080；2中国人民大学环境学院，北京100872) 摘要从长期受农药污染的土壤中分离出一株甲基对硫磷降解菌，经Biolog技术鉴定为多 刺假单胞菌(Pseudomonas spinosa．)，命名为DM-1。研究发现，在葡萄糖作为外加碳源的条件下， DM一1能高效降解甲基对硫磷，28h对200 ppm的甲基对硫磷降解率达95％以上。本实验研究了 外加碳源浓度、酸碱度和底物浓度对菌株降解农药的影响；采用气质联用(GC-MS)初步鉴定其降 解产物为低毒的氨基甲基对硫磷，并对其共代谢作用机理进行了初步探讨。 关键词 生物降篇 多刺假单胞菌 甲基对硫磷 共代谢 1 引言 甲基对硫磷(MethylParathion，简称MP)是高毒有机磷杀虫剂L1J，分子式为C。H，。 NOsPS，化学名称为0，O一二甲基O一(对一硝基苯基)硫逐磷酸酯。由于具有高效、经济等特 点，甲基对硫磷曾被广泛应用于农业生产与害虫防治，同时，也带来了一系列负面效应，其残毒 造成环境与食品的严重污染，并产生大量的希虫剂废物，严重影响了人们的身体健康及出口农 产品的质量等。如何有效地处理残留农药，避免对环境及人类的损害，成为人们亟待解决的 问题[2|。 用传统的物理化学方法处理农药残留，难度大，成本较高，处理效率低，且容易造成二次污 染。采用微生物降解技术来可以较好地解决农药残留问题。研究发现微生物对农药的代谢主 要有矿化、水解和共代谢等方式L3J3。有关甲基对硫磷的微生物降解也已有很多报道[4～7]，一 般是将农药作为其惟一碳源或氮、磷源，将其水解或矿化[8’9]，而对共代谢降解[11，12]的报道 则较少。作者从长期受农药污染土壤中筛选分离出一株降解细菌，能够以共代谢的方式高效 转化甲基对硫磷，本文报道了对该菌的分离筛选及其有关降解特性的研究。 2材料和方法 2．1样品 2．1．1供试菌株从长期受农药污染的土壤中分离。 2．1．2试剂甲基对硫磷分析纯(98％)，中国科学院动物研究所，农业虫鼠害综合治理 研究国家重点实验室抗性分子遗传组存放；甲基对硫磷标准品(99．0％)，购自农业部农药检 基金项目：国家“863”计划项目(2002AA601160) *通讯作者。E-mail：Qiaocl@ioz．ac．crl Ⅱ 农药与环境安全 149 定所。 2．2培养基 2．2．1LB培养基见参照文献L12J； 2．2．2牛肉膏蛋白胨培养基见参照文献[12] 000 2．2．3无机盐培养基在1 NaCl，0．2 mL水中，0．5g gMgSO。，0．5 g(NH。)2SO。； 1．5gK2HP04，0．5gKH2P04，0．05CaCl2；0．02 g gFeS04；0．002g酵母粉，pH值7．0， 121℃高压灭菌20 rain，固体培养基加15％的琼脂。 2．3．4含碳培养基基础培养基中加入一定量葡萄糖。 2．3菌株的分离、筛选与鉴定 2．3．1 菌株的分离、筛选 将采集的农药污染土样配制成20％的悬浮液，然后以5％的 接种量接到含50 mg／L甲基对硫磷的无机盐培养基中，振荡培养；传代培养6代，逐渐提高 MP的浓度至600 mL菌液，适当稀释后，涂布于含有500