甲醇沉淀法去除人血清高丰度蛋白质的实验研讨.pdf

医学研究生学报 2012年 11月 第25卷第 11期 JMedPostgra，Vo1．25。No．11．November，2012 ·ll51· 论 著 (基础研究) 甲醇沉淀法去除人血清高丰度蛋 白质的实验研究 曹璐颖，李 克，郑文杰 【摘要】 目的 常用人血清高丰度蛋白质(highabundantproteins，HAP)去除方法操作较繁且成本高，文中探索建立简便 有效的甲醇沉淀法去除人血清HAP。 方法 用不同体积的甲醇处理血清样品，然后与原血清样品上样进行十二烷基磺酸 钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (sodiumdodecylsulfate—polyacrylamidegelelectrophoresis，SDS。PAGE)分析，并对去除 HAP后的样品进 行蛋白定量检测。 结果 SDS显示 ，经 甲醇处理过的血清样品与原血清电泳结果相比，相对分子质量在50000～ 80000间的清蛋白等HAP被明显去除，血清清蛋白平均浓度显著降低，由(47．65±0．35)g／L下降至(1．164-0．08)g／L，去除 率达97％以上，占血清总蛋白质比例由65．4％下降为49．3％，其差异具有统计学意义(P0．01)。同时一些被HAP掩盖的 低丰度蛋白质(1owbaundantproteins，LAP)有所显现和保 留。 结论 甲醇沉淀法可简便有效地去除人血清中清蛋 白等 HAP，为进一步行血清蛋白质组学分析奠定基础。 【关键词】 甲醇沉淀法；高丰度蛋白质；低丰度蛋白质；清蛋白去除 【中图分类号】 R446．1 【文献标志码】 A 【文章编号】 1008-8199(2012)11-1151-04 EstablishmentofmethylalcoholpreciFIiattionmethodforremovinghighabundantproteinsinhumanserum CAOLu．ying，LIKe，ZHENGWen-jie (1．Collegeof Science，NanjingNormalUniversity，Nanjing210046，Jiangsu，China；2．DepartmentofClinicalLa- boratoryMedicine，Na ngGeneralHospitalofNa ngMilitaryCommand， ，Nanjing210002，Jiangsu，China) [Abstract] Objective Thecommonmethodofdepletingthehighbaundnatproteinsinhumna sel31mistoocomplicatedandex— pensivetobeappliedtoclinicalpractice．Inthisstudy，na effectivenadsimplemehtod ofmethylalcoholprecipitationwasestbalishedfor theremovalofserumhihgbaundnatproteins． Methods Theseruinalbuminofhealhtycontrolswasprecipitatedbydifferentvolume methylalcoho1．TheremovaleffectWaSnaalyzedwithone—dimensionalsodiumdodecylsulfate·polyacrylamidegelelectrophoresis(SDS- PAGE)nadquantitativemethod ofalbumin． Results Comparedwiththegelimagesoftheoriginalserum．，thebnadofproteinwithmo— lecularweightbetween50000—80000WaS removed．Theresuhsshowedhtattheaverageconcentrationofalbumininhteserum wasde- creasedfrom (47．65±0．35)s／