畜禽体外培养细胞的凋亡及融合研讨.pdf

Animal Biotechnology。Bulletin 畜禽体外培养细胞的凋亡及融合研究+ 张艳艳，李晗，丛义梅，关伟军，马月辉“ (中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京，100094) 摘要：奉稿验首先成功地建立了安格斯牛和丝羽鸟骨鸡成纤维细胞系，并通过一系列生物 学特性检测验证所建细胞系的质量后，进行了细胞融合及其凋亡的研究．细胞融夸试验利用伊 红和DAPI列-两组细胞的细胞质和细胞核分别染色，再用50％班B促融90s；细胞凋亡试验采用 DAPI对细胞核进行染色，激光共聚焦显微镜明察两者结果：安格斯牛和丝羽鸟骨鸡的细胞融合 率为卯．2％，安格斯牛自身细胞融合率为94．9％，丝羽鸟骨鸡自身细胞融合率为92．4％；安格 斯牛和丝羽鸟骨鸡的细胞凋亡率分别为：1．2％和0．9％．此项研究可为单克隆抗体的制备、核 移植、形成异核体或增殖的单核杂交细胞、互补分析和基因表达等方面的研究提供理论依据和 技术支持。 关键词：细胞系；细胞凋亡；细胞融舍 两个或两个以上的异源(种、属间)细胞或原生质体在外力(诱导剂或促融剂)作用下相互接触．使其发 生膜融合、胞质融合和核融合进而形成杂种细胞的细胞融合技术在核质关系、基因定位、基因调控、遗 传互补、细胞免疫、疾病发生、膜蛋自动力学等生命科学领域已取得了开创性的研究成果。而对于细胞 在一定的生理或病理条件下发生的由基因控制的细胞主动的、程序性的、固有的、自主性死亡的细胞凋 亡研究，特别是其与细胞增殖的动态平衡，为揭示有机体生长发育、内环境稳定和免疫调节等方面的研 究提供了重要的理论依据。 目前，国内外以畜禽体外培养细胞为试验材料进行细胞融合和细胞凋亡研究的报道并不多见，缺乏 相关的研究背景。因此，利用本实验室建立的安格斯牛和丝羽乌骨鸡的细胞系进行细胞凋亡和细胞融合 研究，对于以体细胞形式保存的体细胞系的有效利用、单克隆抗体的制备、核移植和基因表达等方面的 研究具有重要的参考价值。 1材料与方法 1．1材料 本实验室所培养的丝羽乌骨鸡和安格斯牛体外培养细胞 1．2方法 1．2．1细胞融合 本试验对丝羽乌骨鸡自身细胞间、安格斯牛自身细胞问以及丝羽乌骨鸡细胞与安格斯牛细胞等三组 细胞进行了细胞融合研究，步骤如下： (1)伊红染色：将消化下来的细胞加培养液离心后弃上清，收集细胞至离心管中，加95％乙醇作 用5s，再用伊红染色液染色30s～2mill(可以根据染色结果和要求调整时间)，最后用70％乙醇洗涤2 次后即可直接观察。 It (2)DAPI染色：同上收集培养的细胞，先用1 g／ml的DAPi-qj醇工作液冲洗一次后再用其浸染 ‘项目资助：基础性工作重大专项(200IDEAl0006)，国家自然科技资源平台建设项目(2004DKA30450)。 作者简介：张艳艳(1978-)，女，山东人，博士生，研究方向为家音生殖内分泌学 E础扯 ．I通讯作者：马月辉(1964-)男，吉林人，博士，研究员，博导，研究方向：动物遗传资源，电话：010 yuehui．ma@263．net 第十次全国畜禽遗传标记研讨会论文集 细胞，37C温育15rain，倒掉染色液，用甲醇冲洗一次。 (3)将上述两种分别染色的细胞悬液混合于一个离心管中，轻摇试管并逐滴加入37*(2预热的50％ ml，以中止PEG的作用。 聚乙二醇溶液(PEG)0．4ml，在37℃水浴放90s后，缓慢加入无血清培养液5 封塞并慢慢倾转离心管4～5次，1500r／m离心5min。去除上清，只留下约0．1ml液体悬浮细胞。在此 悬浮液中加入5II】l完全的E-MEM培养液(系指加入血清的培养液)，混匀后滴片作观察用。 (4)用激光扫描共聚焦显微镜观察：从形态上识别两种亲本细胞并观察其中