番鸭细小病毒荧光定量PCR方法的建立及初步应用研究.pdf

第35卷 第3期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．35．NO．3 2013年 3 月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine Mar． 2013 doi：10．3969~．issn．1008-0589．2013．03．12 番鸭细小病毒荧光定量 PCR方法的建立及初步应用 谢丽基，谢芝勋 ，刘加波，庞耀珊，邓显文，谢志勤，范 晴 (广西壮族 自治区兽医研究所 ，广西 南宁 530001) 摘 要 ：为建立一种快速检测番鸭细小病毒(MDPV)的方法，本研究根据 GenBank中MDPV的REP基因序 列 ，设计一对特异性 引物和一条 TaqMan探针。对反应条件和试剂浓度进行优化 ，建立了检测MDPV的荧光定量 PCR方法。检测结果表 明，该方法检测敏感性达到 20copies，比常规PCR灵敏度高 100倍 ；而且该方法对鸭 I型 肝炎病毒、鸭圆环病毒、鹅细小病毒、鸭副粘病毒、鸭瘟病毒和禽流感病毒等的检测均为阴性 ，具有 良好的特异 性：该方法的批 内和批间的检测变异系数均小于2％。对广西地区鸭群收集的ll8份病料进行检测，其MDPV阳 性率为 11．02％。结果提示广西地区的鸭群 中MDPV的感染比较普遍 ，建立的荧光定量 PCR方法可以用于 MDPV的临床快速检测。 关键词：番鸭细小病毒；荧光定量PCR；建立 中图分类号 ：$852．65 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008．0589(2013)03．0218-04 Developmentandapplicationofareal-timePCR assayfor detectionofMuscovyduckparvovirus XIELi-ji，XIEZhi-xun，LIUJia—bo，PANGYao—shan，DENGXian—wen，XIEZhi—qin，FANQing (GuangxiVeterinaryResearchInstitute，Nanning530001，China) Abstract：FordetectionofMuscovyduckparvovirus(MDPV)infection，areal—timePCRassaywasestablishedwithapairof primersanda TaqManprobewhichweredesigned andsynthesizedaccordingtotheconservedREP genesequencesofMDPV． Thereal—timePCR assaywasspecifictodetectMDPV，butnocross—reactionwith duckhepatitisvirustypeI，duck circovirus， goslingplagueviurs，duckparamyxovirus，duckplagueviursandavianinfluenzaviurs．Inaddition，thedetectionlimitofthisassay was20viralcopieswhichwas100timeshigherthanthatoftheconventionalPCR．Thecoefficientsofvariabilityforintra—assay and inter—assaywereboth lessthan2％ ．Furthermore．detection of118duckclinicalsamplesshown thatthepositiveratewas 11．02％．Itsuggestedthatthereal—timePCR couldbeusedasarapidtoolofrdetectionofMDPV ． Keywords：Muscovy duckparvovirus；real—timePCR；development 番 鸭 细 小 病 毒 (Muscovy duckparvovirus， 脂扩散试验