桑蚕丝丝心蛋白结晶域SFX序列替代人αsynuclein蛋白GAV基序的初步研究.pdf

摘要 fibroin)结晶域与人类帕金森综合症的致病 triOri丝丝心蛋白(silk 桑蚕Bombyx 氨基酸组成的保守序列和一些无规卷曲在一定条件下发生整体的结构转换而导致 纤维化所致。研究发现在这两种蛋自中存在的疏水片段是形成B折叠的关键。在体 序列对其积聚起决定性作用。为了进一步确证这一观点，前人通过基因重组的方法 N．末端氮基酸残基l一74)蛋自片段并研究其积聚行为，结果表明蛋白质中的局部区 域对其整体的积聚行为有调节作用。GAV基序需要存在于具有无规卷曲的结构的宿 主蛋白中才能引发其整体的结构转换，并发生纤维化。a．突触核蛋自的片段为 成，它们在蛋白质的积聚过程中可能起到不同的作用。Gly最具柔性，有助于序列 在溶液中保持无规卷髓状态；Ala可以诱导形成蛋白质二级结构：丽疏水性的Val 具有很强的形成D一折叠的趋向。在蚕丝丝心蛋白结晶区中含有大量疏水性的、保守 性很强的重复序列，它们主要由Gly，Ala和Val组成。丝心蛋白结晶域的几段重复 蛋白由无规卷曲向D折叠的转变及积聚过程中及蚕吐丝过程存在着成核依赖型的机 理。由于o【．Syn74积聚比值．Syn更快，过程更典型，为了便于构建质粒，研究a．Syn 蛋白的积聚核心在被其它积聚核心所替换后是否还可以正常纤维化，我们用桑蚕丝 丝心蛋白的重复片段替换a．Syn74的核心。利用pET载体系列的通用引物T7 promoterprime和与基因序列特异性结合的引物进行PCR反应，然后通过基因上的 Nde I和BamH I酶切位点直接双酶切后，将产物插入到pET-3a表达载体上。对 force n—Syn蛋白的GAV基序在功能上不能被桑蚕silkfibroin的SFX序列替代，成为证 明GAV基序对人仪一Syn蛋白的特异积聚行为起重要作用的又一有力证据，为蛋白质 淀粉样化的分子机制研究提供了借鉴，也对人工丝蛋自的研究具有指导意义。 关键词：桑蚕丝心蛋白 a．突触核蛋白积聚纤维化 Abstract inthe domains silkfibroin The ofthe mori Bombyx crystallized aggregationprinciple in Parkinson’s issimilartothatof whichisa human protein ot．Synuclein pathogeneic disease．Inthecertain conservative of conditions，avery sequencecomposedhydrophobic the of whole ind血etheconservation acidsand randomcoll would amino some sequences beenfoundthe inthese stru