疫苗的制备PPT.pptx

疫苗如何制备;疫苗主要指将病原微生物（细菌、病毒、真菌、立克次氏体、支原体、衣原体等）及其代谢产物，经过人工减毒、灭火或利用基因工程等方法制成的用于预防传染病的免疫佐剂，例如流感疫苗、乙肝疫苗、霍乱疫苗等。;疫苗的产生;疫苗的产生;疫苗的产生;疫苗及其技术的发展简史;减毒活疫苗制备（卡介苗）——第一次疫苗革命;人为处理使病原微生物失去毒力或降低毒力;基因重组疫苗技术——第二次疫苗革命;基因重组技术研究相关基因和蛋白质产物;反向疫苗学技术——第三次疫苗革命;疫苗;组成;当机体通过注射或口服等途径接种疫苗后，疫苗中的抗原分子就会发挥免疫原性作用，刺激机体免疫系统产生高效价特异性的免疫保护物质，如特异性抗体、免疫细胞及细胞因子等，当机体再次接触到相同病原菌抗原时，机体的免疫系统便会依循其免疫记忆，迅速制造出更多的保护物质来阻断病原菌的入侵，从而使机体获得针对病原体特异性的免疫力，使其免受侵害而得到保护。;类型与特点;减毒活疫苗;减毒活疫苗;灭活疫苗;灭活疫苗;亚单位疫苗;类型与特点;联合疫苗;核酸疫苗;治疗性疫苗;疫苗的制备方法;疫苗生产的一般流程;灭活全毒疫苗——流感全病毒灭活疫苗;流感病毒;流感病毒;流感全病毒灭活疫苗;（1）鸡胚 毒种传代和制备：来源于SPF（Specific pathogen Free）鸡群 疫苗生产：来源于封闭式房舍内饲养的健康鸡群、9-11日龄无畸形、血管清晰、活动 （2）毒种 WHO推荐并提供的甲型和乙型流感病毒株;2. 毒种种子批的建立及检定 符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定;2. 毒种种子批的建立及检定 建立：以毒种为基础传代（5代以内得成品疫苗） 检定：血凝素型别鉴定试验 血凝抑制试验 单向免疫扩散试验 病毒滴度：鸡胚半数感染剂量法 血凝滴度：血凝法 无菌检查、支原体检查 外源性禽白血病病毒、禽腺病毒检测：ELISA 保存：冻干毒种-20℃以下，液体毒种-60℃以下 ;3. 单价原液的制备 各流感病毒工作种子批分别接种 （尿囊腔），33-35℃培养48-72h 病毒收获（尿囊液） 收获液检定 微生物限度：菌数105CFU/ml，沙门氏菌为阴性 血凝滴度 收获液合并;3. 单价原液的制备 病毒灭活（甲醛≤200μg/ml）、验证及内毒素含量测定 浓缩（超滤）、纯化（柱色谱法、蔗糖密度区带离心）及过滤除菌（硫柳汞） 单价原液保存（2-8℃）;4. 半成品的制备 对单价原液根据相同血凝素含量进行配制：15-18μg/剂 补加硫柳汞 5. 成品的制备 半成品分批、分装及冻干后包装：0.5-1.0ml/剂，含各型流感病毒株血凝素为15μg/剂;（二）检定要求 1. 单价原液的检定 鉴别试验：血凝抑制试验、单向免疫扩散试验 病毒灭活验证试验：鸡胚存活率、血凝试验 血凝素含量检测：单向免疫扩散试验;2. 半成品的检定 游离甲醛含量≤50μg/剂 硫柳汞含量≤50μg/剂 血凝素含量：配制量的80%-120% 无菌检查;3. 成品的检定 鉴别：单向免疫扩散试验 外观：乳白色液体，无异物 pH值：6.8-8.0 硫柳汞含量≤ 50μg/剂 蛋白质含量≤ 200μg/剂 血凝素含量：配制量的80%-120% 卵清蛋白含量≤ 250 ng/剂 抗生素残留量≤ 50 ng/剂;血凝抑制实验;单向免疫扩散实验;酶联免疫吸附测定;间接法ELISA检测——检测抗体 ;夹心法ELISA检测——检测大分子抗原 ;竞争法ELISA检测——检测小分子抗原