免疫与临床..ppt

双向琼脂扩散试验  是将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，二者自由向周围扩散并相遇，在比例合适处形成沉淀线。如果反应体系中含两种以上的抗原抗体系统，则小孔间可出现两条以上的沉淀线。本法常用于抗原或抗体的定性 、组成和两种抗原相关性分析的检测。 对流免疫电泳 是先将待侧血清标本作琼脂凝胶电泳，血清中各蛋白组分被分成不同的区带，然后与电泳方向平行挖一小槽，加入相应的抗血清，把分成区带的蛋白抗原成分作双向免疫扩散，在各区带相应的位置形成沉淀弧。该法常用于血清蛋白种类分析，以观察Ig的异常增多或缺失。 定义：是用酶、荧光素、放射性核素等标记物标记抗原或抗体的试验技术。通过检测标记物来反映抗原抗体反应情况，间接测出待检抗原或抗体的含量。本法特异性强，敏感性高。 主要的免疫标记物 类别 标记物 用途 荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化 镧系元素螯合物 免疫分析测定 放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析测定 125I、131I 酶 HRP、AP 免疫组化 免疫分析测定 化学发光物 Luminol、lucigenin 免疫分析测定 金属颗粒 胶体金、铁蛋白 免疫组化 免疫分析测定  是用酶（常用的有辣根过氧化物酶，HRP和碱性磷酸酶，AP) 标记的抗体进行的抗原抗体反应。EIA将抗原抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于底物后显色来判定结果。 酶联免疫吸附试验( ELISA) ：是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。用洗涤法将液相中游离成分洗除。主要有双抗体夹心法、间接法等。测定可溶性抗原或抗体 酶免疫组化法：测定组织中或细胞表面的抗原。 概念：用荧光素（常用的有异硫氰酸荧光素，FITC) 与抗体连接成荧光抗体，再与待测标本的抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原抗体复合物散发出荧光，借此对标本中的抗原作鉴定和定位。有直接、间接及补体结合荧光法。 直接荧光法：将荧光素直接标记抗体作标本染色。该法的优点是特异性强，但其缺点是每检测一种抗原必须制备相应的荧光抗体。 间接荧光法：用一抗与标本中的抗原结合，再用荧光素标记的二抗染色。该法的优点是敏感性比直接法高，制备一种荧光素标记的二抗可用于多种抗原的检测，但非特异性荧光亦会增加。 补体结合荧光免疫法：此法是在间接法的第一步抗原—抗体反应时加入补体，使之与抗原——抗体复合物结合；再用荧光素标记的抗C3抗体进行示踪。 (RIA) 是用放射性核素标记抗原进行的免疫学检测技术。它将放射性核素显示的高灵敏性和抗原抗体反应的特异性结合，使检测的敏感性达pg水平。常用于标记的放射性核素有I125和I131。 常用于胰岛素、生长激素、药物等微量物质的测定。 Ag* Ab Ag 标记抗原 特异性抗体 待测抗原 ( Ag*-Ab)+ (Ag-Ab) 抗原抗体复合物 分离Ag*-Ab 和游离Ag* 从标准曲线上读知含量 测定Ag*-Ab和/或游离Ag*放射性 放射免疫测定法(RIA)示意图 是以硝酸纤维薄膜为载体吸附抗原，用胶体金标记代替酶标抗体的免疫标记技术。 斑点金免疫层析实验（一步金法）：HCG 2. 细胞免疫检测 免疫细胞数量检测 免疫细胞的功能检测 淋巴细胞类型和数量的测定 （1）E花环试验：E花环试验可用于检测T细胞数目。EA花环试验可用于检测B细胞数目。 （2）荧光免疫法：常采用间接免疫荧光法。 （3）流式细胞术：用流式细胞仪（FCM)。 花环试验示意图 免疫细胞功能的测定----T细胞功能测定 体内法 ： 用生物抗原或 化学抗原作皮内试验。 OT-PPD皮试 SD-SK皮试