十种中药成分对鸡胚成纤维细胞生长的影响研究.pdf

十种中药成分对鸡胚成纤维细胞生长的影响+ 胡元亮孔祥峰张宝康刘家国王德云 (南京农业大学中兽医学研究室江苏南京210095) 摘要：为了筛选免疫增强作用较好的中药成分，为研制新型免疫增强剂提供理论依据，选择当归多 究对象，在提取制备并测定它们对体外培养的鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度的基础上，分别稀释成 测定各中药成分对CEF增殖的影响。结果表明，所有中药成分均能不同程度地促进CEF增殖，并有一定 的量效和时效关系。 关键词：中药成分；鸡胚；成纤维细胞；细胞培养法 黄芪、当归、板蓝根、淫羊藿、蜂胶和人参是常用的补虚中药，研究表明，其中许多 成分具有免疫增强作用”41。在以前的研究中，笔者提取了黄芪多糖(astragaluspolysac- charide，APS)、当归多糖(Chinese∞gcnca flavone，EF)、黄芪皂甙(astragalus PF)、淫羊藿黄酮(epimedium saponin，AS)和人参 纤维细胞(CEF)的安全浓度Ⅲ。本研究进一步测定了安全浓度范围内的lO种中药成分对 CEF增殖的影响，旨在对它们进行全面评价．以筛选出免疫增强作用较好的中药成分，为 研制新型免疫增强剂提供理论依据。 1材料与方法 1．1试验药物 PF和EF，分别用聚酰胺柱层析法(AF和EF)和酸碱沉淀法(PF)提取，用芦丁法测定 含量。 AS和GS，用大孔吸附树脂柱层析法提取，TLC．分光广度法澳0定含量。以上10种中 药成分，根据对CEF安全浓度的测定结果，分别用细胞维持液稀释成5个不同浓度(见结 果中各表浓度栏)．常规潸毒后备用。 ·基金项目：国家自然科学基金资助项目 作者简介：胡元亮(1953一)，男，教授，博士，博士研究生导师。 ·257· 1．2主要试剂 (100IU／m1)和犊牛血清(达5％为细胞生长液，达2％为细胞维持液)；胰蛋白酶，科威 公司进口分装，称取O．259溶于100mlPBS中，调节pn值至7．4，0．22Itm混合纤维素酯 u PBS(pa7．4)溶解成2％溶液，0．22m混合纤维素酯微孔滤膜过滤除菌，分装，4。C避光 保存，1个月内用完”)；裂解液，二甲亚砜(DSMO)，分析纯。 1．3主要仪器 酶联免疫检测仪，国营华东电子管厂产品；细胞培养瓶、96孔细胞培养板和6孔细胞培养 板，科威公司产品。 1．4实验方法 根据文献15o中介绍的方法制备CEF。将细胞数调至5×t05个／ml后加到96孔培养板 u ul，每种浓 中，每孔1001；随后分组加药，实验组加入各种浓度的中药成分，每孔100 度4孔；对照组，每种药物设4孔，加入等量细胞生长液；另设一无细胞孔作为测定时的 空白调零孔；均同时重复5块细胞板；然后置37。C，5％C02培养箱中培养，分别在培养 24、36、48、60、72h时各取1块细胞板测定细胞增殖情况。 1．5细胞增殖测定方法 l裂解液，室温震荡10min使结晶物溶解，然 快速翻转．甩去孔内培养液，每孔加入150u 后用酶联免疫检测仪测定570nm波长下光密度(oD)值，作为细胞增殖的指标。数据用 SPSS软件统计分析，比较同期各组细胞增殖的差异性。 2结果与分析 2．1APS对CEF增殖的影晌 60h时各浓度组的OD值均显著大于对照组，其余时间点高浓度组的OD值多小于或 显著小于对照组，低浓度组在36h稍大于对照组，说明APS在60h时显著促进细胞增殖． 低浓度时前期促进增殖(表1)。 2．2CAPS对CEF增殖的影响 u 1600和1200 u 组，300和150 g／rrd两个低浓度组在加药后36、60h时的OD值显著大于对照组，说明 CAPS高浓度时抑制CEF增殖，低浓度在后期促进增殖(表2)。 ·258· 表1APS对CEF