多巴胺受体和脂筏对高血压患者细胞NADPH氧化酶的作用研究.pdf

安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2013Mar；48(3) ·211· 多巴胺受体和脂筏对高血压患者细胞 NADPH氧化酶的作用 鹿 敏 ，刘晓颖 ，韩卫星 摘要 目的 探讨还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化 控制Nox亚单位在肾脏近 曲小管细胞的表达，从而 酶 (NADPH氧化酶即Nox)亚单位在高血压患者肾脏近曲小 导致氧化应激状态。现探讨Nox亚单位在高血压患 管细胞中的表达及其活性变化 ，以及多巴胺受体和脂筏在其 者中的表达及其活性变化，以及多巴胺受体及脂筏 中的调节作用。方法 细胞分为正常组和高血压组，未经任 的调节作用。 何药物刺激的两组细胞分别作为正常对照组和高血压对照 组，采用葡萄糖浓度梯度超速离心法提取细胞膜的脂筏和非 1 材料与方法 脂筏区蛋白，经 Westernblot检测Nox亚单位蛋白的表达 ，光 1．1 材料 泽精化学发光法动态测定细胞膜Nox的活性。结果 多巴 胺受体激动剂 fenoldopam明显减少 gp91phox在正常对照组 1．1．1 细胞株 分化 良好的高血压和正常血压人 [(17±3．3)％]和高血压对照组 [(20±3．4)％，P0．05] 群的永生性肾近 曲小管细胞，由美国弗吉尼亚大学 细胞膜脂筏区域的表达，降低正常对照组 p22ph[(15± 健康科学中心的Robin．A．Felder教授提供。 2．0)％，P0．05]、p67Ph、rac1在脂筏区的表达，但不能减 1．1．2 仪器与试剂 AutoLumatPlusLB953(EGG 少高血压对照组p22 、v67ph、racl蛋 白的表达；胆固醇耗 Beahhold公司)；单克隆抗人 Nox亚单位 的抗体 竭剂 3-cD减少正常对照组 gp91phox、p22ph在脂筏 区的表 (gp91phox、p22 、p67ph)、抗 rac1抗体、二抗 (Santa 达 ，不能减少高血压对照组 Nox亚单位的表达；高血压对照 Cruz公司)；蛋 白酶抑制剂、fenoldopam、胆固醇耗竭 组 Nox的基础活性是正常对照组的5倍。结论 高血压患 剂B．CD、胆固醇、光泽精、NADPH、二苯基碘 (diphe— 者肾脏近曲小管细胞具有较高的Nox亚单位的活性 ，多巴胺 nyleneiodonium，DPI)、Apocynin(Sigma公司)；BCA 受体和脂筏对 Nox亚单位的抑制作用减弱。 试剂盒、ECL试剂盒 (Pierce公司)；细胞培养试剂 关键词 NADPH氧化酶 ；多巴胺受体；脂筏；高血压 (Invitrogen公司)。 中图分类号 R544．1 1．2 方法 文献标志码 A 文章编号 1000—1492(2013)03—0211—05 1．2．1 细胞培养及处理 分化 良好的高血压和 正常血压人群的永生性肾近曲小管细胞分别作为高 氧化应激是指在各种有害刺激时机体或细胞内 血压组和正常组，在含5％胎牛血清的DMEM／F12 自由基的产生和抗氧化防御之问的严重失衡，活性 培养液，37℃、5％的CO 孵育箱中培养。细胞在无 氧(reactiveoxygenspecies，ROS)的积蓄引起细胞毒 血清的DMEM／F12培养液中饥饿 1h后给予药物 性反应而导致组织损伤过程。还原