化合物黄酮提取以及检测方法的分析研发.doc

化合物黄酮提取以及检测方法的研究 黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一大类化合物, 在银杏叶、山楂、杜仲、山香圆叶、水芹、竹叶、黄芪、丹参等植物中均有检出。到目前为止, 已经发现有5000 多种植物中含有黄酮类和异黄酮类化合物[1]。黄酮类化合物的结构特点是具有C6- C3- C6 的基本骨架,根据中间三碳链的氧化程度、B 环( 苯基) 连接位置( 2-或3- 位) 以及三碳链是否呈环状等特点, 分为许多不同类型: 包括黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮、二氢异黄酮、查尔酮等化合物[2]。现代研究证明黄酮类化合物是重要的抗氧化剂, 其生理作用是多种多样的, 例如芦丁、槲皮素等能够增强心脏收缩; 杜鹃素具有止咳祛痰作用; 黄芩苷具有抗菌消炎、抑制肿瘤细胞作用; 水飞蓟素具有保肝作用等[3]; 此外, 黄酮类化合物还有降血脂、止血、抑制血小板聚集等多种药理作用。正是其上述生物活性引起了人们的广泛重视, 对该类化合物的研究已成为国内外医药界研究的热门课题, 是一类具有广泛开发前景的天然药物[4]。黄酮类化合物在人体不能直接合成, 只能从食品中获得。主要是作为食品添加剂或直接应用于食品中增加其保健作用。例如茶多酚在功能食品中的应用主要是以茶叶及其提取物的形式添加到食品中。茶多酚具有抗疲劳、抗辐射、抗衰老等功能特性, 茶叶具有独特的色、香、味、形, 能使食品增香、调味、着色, 因此茶多酚以茶叶的形式在食品中的应用十分广泛。近年来科学家都积极关注从植物体中提取纯度高、活性强的天然黄酮成分, 并进一步将其加工成有特异功能的保健食品和药品等产品。1 黄酮类化合物的提取方法1.1 有机溶剂提取法甲醇和乙醇是最常用的黄酮类化合物提取溶剂,高浓度的醇( 如90 %左右) 适宜于提取苷元, 60 %左右浓度的乙醇或甲醇水溶液适宜于提取苷类。田呈瑞[5]采用索氏提取法, 利用乙醇提取银杏叶黄酮, 通过单因素试验和正交试验, 确定乙醇提取银杏叶总黄酮的最佳条件为: 银杏叶粉碎至50 目~60 目, 以70 %乙醇按照液固比6∶1 的比例, 于80 ℃条件下提取2 次, 每次1 h,银杏叶总黄酮提取率可达87.6 %。此外, 欧美国家采用的主要溶剂法工艺有: 醇(酮)浸提- 卤代烃萃取- 酮/铵盐萃取法、酮浸提- 氨水沉淀- 混合酮萃取法、酮浸提-综述154食品研究与开发2008 年1 月第29 卷第1 期卤代烃萃取- 铅化物沉淀法和醇(酮)浸提- 甲苯/丁醇萃取树脂法[6]。该工艺采用中等温度50 ℃~60 ℃浸泡, 杂质较少, 经浓缩、水析可除去烷基酚等脂溶性物质, 用CCl4 等非极性溶剂萃取除去蜡质、叶绿素等脂溶性杂质; 调节pH8~9 或Pb( OH) 2 沉降, 可除去原花青素、蛋白质、高分子单宁等杂质, 加入( NH4) 2SO4 等盐, 增加相密度, 有利于C4- C6 酮和醇萃取有效成分和减少乳化现象, 改善分层, 提高有效成分的萃取率[7]。1.2 微波提取法微波加热是透入内部的能量被物料吸收置换成热能对物料的加热, 形成独特的物料受热方式, 具有均匀性的特点, 同时具有反应高效性和强选择性等特点, 而且操作简便, 副产物少, 提取率高及产物纯度高等优点。本法多用在药材的浸出, 在黄酮类化合物的提取上取得了良好的效果。段蕊[8]等人对微波法提取银杏叶中黄酮类物质进行研究, 用175 W 微波强度处理5 min后, 以体积分数80 %的乙醇, 在70 ℃提取1 h, 得到提取物的黄酮类物质质量浓度比未经微波处理的高出18.8 %。此外李嵘与金美芳[9]在以水为介质的条件下,对银杏叶进行微波处理, 提取效果与传统方法对照, 表明此方法提取率高, 省溶剂, 大大提高了提取效率。实验方法是称取100 g 银杏叶丝, 加160 mL 蒸馏水, 微波解冻处理5 min 及15 min, 提取液以440 mL60 %乙醇,55 ℃回流提取。结果表明, 微波处理后进行乙醇水浸提比同样方法未用微波处理可以提高银杏叶中有效成分的提取率达22.6%, 而且大大缩短了提取所需时间。1.3 超临界萃取法超临界流体萃取是利用超临界流体在临界压力和临界温度附近具有的特殊性能作为溶剂进行萃取的一门科学, 最常用的超临界流体为CO2。应用CO2- SPE 技术提取分离黄酮类物质, 具有萃取速度快, 效率高, 操作简单等特点, 产品中没有残留有机溶剂, 与传统的萃取分离工艺相比优势是明显的。此外, 超临界CO2 萃取较易与其它先进技术联用, 成为新型而有效的分离分析技术。孙婷[10]利用超临界CO2 萃取法从银杏叶