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生物實驗技術 實驗手冊 高雄醫學大學 生物醫學暨環境生物學系 張永福 編著 目錄 實驗一 顯微測量 動植物細胞觀察 P.3 P.9 實驗二 細胞成分及生理 P.12 實驗三 RNA萃取 細菌染色體DNA萃取 P.18 P.20 實驗四 RT-PCR及瓊膠電泳 南北方點墨法示範 P.22 P.25 實驗五 限制酶切割 DNA純化 P.28 P.29 實驗六 質體建構 轉型作用 P.31 P.32 實驗七 快速質體DNA篩選 質體DNA少量製備 P.34 P.35 實驗八 蛋白質誘導表現及純化 P.37 實驗九 蛋白質電泳分析 組織蛋白質萃取與濃度測定 P.40 P.42 實驗十 酵母菌雙雜交 西方點墨法示範及蛋白質電泳片乾燥處理 P.44 P.46 實驗一: (1)顯微鏡的使用和顯微測量 實驗目的 世界上的生物類類繁多，，，，。瞭解顯微鏡使用的方法，學習正確使用顯微鏡來觀察及測量各種細胞大小。Binocular compound microscope）(圖1) 的各部名稱及功能: 接目鏡(Ocular或Eyepiece)：裝在鏡筒的上端。放大倍率通常為為 10×、15x，兩個目鏡間的距離可因應各人的雙眼寬度來調整。接目鏡上有焦距調節輪，可因應各人焦距來調整最佳呈像。 鏡筒(Body tube)：介於接目鏡與接物鏡之間，內有透鏡系統。 旋轉盤(Revolving nosepiece)：接於鏡臂末端下方，可360o旋轉。可接不同倍數的接物鏡，以便更換不同倍數的接物鏡。 接物鏡(Objective)：裝於旋轉盤上，一般有scanning power objective (4X)、low power objective (10X)、high power objective (40X)、oil immersion objective (100X) 四種倍率，短者為低倍鏡，長者為高倍鏡。 載物台(Stage)：為放置標本玻片的平台，上面有玻片夾和調節鈕可固定及調整玻片位置。中央有一圓孔，可供下方集光器聚集的光線通過。 集光器(Condenser)：位於載物台下方，由許多透鏡組合而成，用以集合反光鏡反射來的平行光線，增加標本的明暗對比。 光圈(虹膜)(Iris diaphragm)：連接於集光器下方，可用以調整集光器光圈孔徑大小，而調節標本上之光線強弱。 照明器(Illuminator)：位於鏡座上，內設光源為鎢絲燈，直接提供觀察所需之光源。 鏡臂(Arm)：連接鏡筒及鏡座，並供握取顯微鏡。 調節輪(Adjustment knob)：位於鏡柱上，可調整載物台的升降，具有調節焦距的功能。本顯微鏡具有粗、細兩個調節輪。 鏡座(Base)：支持顯微鏡各部。右側有光源調整鈕，可調整照明器內光源亮度；後方接有電源線，有的廠牌尚有光源開關。 　 圖1. 複式光學顯微鏡 複式光學顯微鏡的使用與保養A 顯微鏡的取用 提取顯微鏡時，用一手緊握鏡臂，另一手托住鏡座。若長距離移動時，更應將鏡筒朝內，以免目鏡不慎掉落。 鏡臂向內輕輕將顯微鏡放置在桌上，距桌緣約3公分距離之處。 用拭鏡紙輕拭鏡面。 調整坐椅至適當高度，使自己可以輕鬆地使用顯微鏡。 B 低倍鏡的使用 先將載物台降至最低點，轉動旋轉盤使低倍鏡位於鏡筒正下方。 打開光源，雙眼同時對準雙目鏡，調整集光器及光圈，使視野中之亮度均勻。 將玻片標本放在載物台上，以玻片夾及調節鈕調整玻片位置。轉動粗調節輪，使鏡筒下降至物鏡離玻片約0.1 cm（或直到無法再下降）為止。 由接目鏡觀察，同時緩緩轉動粗調節輪，使鏡筒緩緩上升直至物像明晰，再用細調節輪微調，直到影像清晰為止。若視野太亮或太暗，可調整光源調整鈕及光圈，使視野中之亮度適當。 C 高倍鏡的使用 先使用低倍鏡找到欲觀察的目標，並將它移至視野正中央。 轉動旋轉盤，將高倍鏡接於鏡筒下。 緩慢旋轉細調節輪，使視野中成像更加清晰。 若在高倍鏡下不見物像時，應換回低倍鏡，依照之前的步驟重新找回物像並移至視野中心，再使用高倍鏡。 D 油鏡的使用 先使用高倍鏡找到欲觀察的目標，將該部位調整至視野中央。 將40X高倍鏡轉開，加一小滴油鏡專用油 (Immersion oil) 於所見物像範圍的蓋玻片上，換用100X接物鏡，小心將油鏡浸於油中，重新調整光圈，並緩慢轉動細調節輪，直到影像清晰為止。 使用完畢後，先以拭鏡紙單向擦拭油鏡鏡頭，然後以拭鏡紙沾取酒精或二甲苯擦拭，最後再以拭鏡紙擦拭一遍。鏡頭上切勿殘留油鏡油或藥劑，以免損害鏡頭。 E 注意事項 攜取顯微鏡，必須一手握緊鏡臂，另一手托住鏡座，切勿用單手提 取，以免造成目鏡及反光鏡滑落破損。放置時應小心輕放勿使