无菌检验方法学验证.doc

北京康辰药业有限公司公司 无菌检查方法学验证资料 文件起草： 日期： 文件审核： 日期： 文件批准： 日期： 1.方法概述及方案说明 1.1方法概述：无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检查条件下未发现微生物污染。 我公司无菌检查法采用薄膜过滤法，通过供试品对每一试验菌抑菌活性的检查，并于阳性对照比较，如含供试品各容器中的试验菌生长良好，并和阳性对照容器内的培养结果相似，则供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或抑菌作用消除，供试品可按该法进行无菌检查。若含供试品的任一容器中微生物生长微弱、缓慢或不生长，则供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用。应选择无抑菌作用或抑菌作用消除的检验条件作为供试品的无菌检查方法。 1.2 确认目的 依据2010版《中华人民共和国药典》对注射用尖吻蝮蛇血凝酶的无菌检验方法进行再验证，确认该方法适合于该产品的无菌检查，并确认合适的检验条件，以保证无菌检查方法的科学性和检验结果的准确性。 1.3方案实施的条件 1.3.1验证所需检测仪器 验证所需主要检测仪器及设备表 仪器设备 要求 生化培养箱 完好且校验合格 电脑恒温培养箱 完好且校验合格 1.3.2相关文件：确定验证依据 验证依据表 名称 要求 药品生产质量管理规范 （2010年修订）化学工业出版社 中国药典 （2010年版二部） 2.菌种及培养基来源确认 2.1菌种来源 菌种名称 菌种代码 菌种来源 金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003 中国生物制品检验所 枯草芽胞杆菌 CMCC(B)63501 铜绿假单胞菌 CMCC(B)10104 白色念珠菌 CMCC(B)98001 2.2培养基来源 ：中国生物制品检验所 3.培养基灵敏度验证 3.1培养基灵敏度验证：为证明硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基适合于细菌，真菌的无菌检查，对硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基灵敏度检查。 3.2.参照标准：2010版中国药典二部附录XI H无菌检查法。 3.3.试验材料： 3.3.1. 被验证培养基： 品名：硫乙醇酸盐流体培养基 规格： 250g/瓶 批号： 090827 生产厂家：北京三药科技开发公司 品名：改良马丁培养基 规格： 250g/瓶 批号： 090605 生产厂家：北京三药科技开发公司 3.3.2. 仪器设备： 3.3.2.1.压力蒸汽灭菌器 3.3.2.2.净化工作台 3.3.2.3.电热鼓风干燥箱 3.3.2.3.3.生化培养箱 (23～28℃) 3.3.2.3.4.恒温培养箱(30～35℃) 3.3.3. 稀释剂：0.9%无菌氯化钠溶液 3.3.3.3. 验证用培养基： 名称 生产厂家 批号 营养琼脂培养基 北京三药科技开发公司 100506 玫瑰红钠琼脂培养基 北京三药科技开发公司 080611 3.4.菌液制备： 3.4.1.取经培养18～24小时的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至小于100cfu∕ml的菌悬液备用。 3.4.2.取经培养24～48小时的白色念珠菌的改良马丁培养物1ml加入到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至小于100cfu∕ml的菌悬液备用。 3.5.菌液计数：（每种菌液接种2个平皿） 分别取上述制备的金黄色葡萄糖球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各1ml加入培养皿，每种菌液平行做2皿，注入不超过45℃营养琼脂培养基15～20ml，置30～35℃培养箱培养二天，取上项制备的白色念珠菌菌液1ml加入培养皿，平行做2皿，注入不超过45℃的玫瑰红钠琼脂培养基约15～20ml，置23～28℃培养箱培养三天。 3.6.无菌培养基的无菌性检查 3.6.1培养基的配制 硫乙醇酸盐流体培养基的配制：取硫乙醇酸盐流体培养基29.25g，加1L蒸馏水，加热煮沸使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml。 营养肉汤培养基的配制：取硫乙醇酸盐流体培养基18g，加1L蒸馏水，加热搅拌使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml。 改良马丁培养基的配制：取改良马丁