丁卡因的半致死量测定.docx

丁卡因的半致死量测定【实验目的】了解药物毒性实验的概念，掌握药物的半致死量（LD50）的测定方法【实验材料】实验对象小鼠，体重13~26g，雌雄各半实验药品丁卡因实验器材电子天平、注射器（1ml）、针头（5号）、棉签、托盘、标记液【实验方法】预备试验：初步摸出0和100%死亡率的剂量范围，并求出公比。取9只小鼠，分成3组，各组之间的剂量按等比数列排列，（2:1或3:1），使最小剂量（a）死亡率为0，最大剂量（b）死亡率为100%，然后按照下面的公式求出公比r(r应小于1.40，一般在1.11与1.33 之间)(n为正式试验中的动物组数)本试验得出的最小剂量a=31.8mg/kg，最大剂量b=78.8mg/kg，而正式实验组为6组，故公比r=1.2，于是可计算出各组的给药剂量分别为31.8，38.1，45.7，54.8，65.7，78.8（mg/kg）正式试验：本实验要求各组之间的剂量按等比数列排列，并要求最小剂量的反应率为0%，最大剂量反应率为100%或接近100%（但尽量避免重复出现0%或100%）。根据动物的体重和雌雄，随机分成6个剂量组，每组16只，是个猪动物的性别、体重构成比相同，每组为一个剂量组。各只小鼠逐只称重、标记，将6种浓度的丁卡因（1.58mg/ml、1.88 mg/ml、2.28 mg/ml、2.74 mg/ml、3.28 mg/ml、3.94 mg/ml）按0.2ml/10g给药（ip）。观察给药后动物表现、死亡时间，观察时间以2h为限。记录各组动物死亡数，分别算出各组死亡率，并记录。汇总全班试验结果，并列表。结果计算：采用相应软件，使用甲醛概率单位法(Bliss)计算法LD50值，并根据拟合曲线，求出LD5和LD1的数值，以便于求药物的安全范围及可靠安全系数。【实验结果】表1：实验阳性反应结果样品名称:丁卡因实验动物:小鼠给药途径:i.p.实验日期:2010/4/29剂量（mg/kg）31.8 38.1 45.7 54.8 65.7 78.8死亡率（死亡数/动物数）0/16 2/16 4/16 12/16 16/16 16/16由于剂量为65.7mg/Kg时死亡率已经是100%，所以可以只取前五组数据进行分析。Bliss分析结果如下（采用spss17.0与bliss.exe两款软件分析）：表2：用 Bliss 法计算半数致死量剂量D (mg/Kg)31.8 38.1 45.7 54.8 65.7对数剂量Log(D)1.5024 1.5809 1.6599 1.7388 1.8176动物数 (只)16 16 16 16 16死亡数 (只)0 2 4 12 16死亡百分率 (%)0.0 12.5 25.0 75.0 100实验机率单位 Y— 3.8496 4.3258 5.6742 —回归机率Y’2.3368 3.4667 4.6037 5.7388 6.8729回归方程 y(Probit)=-19.289+14.394Log(D)半数致死量LD50=48.691mg/KgLD50(Feiller校正)95%的可信区间=45.559~52.104mg/Kg故不必做异质性校正LD5=37.426mg/KgLD1=33.561mg/Kg【实验讨论】半数致死量（LD50）是指药物能使半数动物死亡的剂量。故本实验中以小鼠是否死亡作为观察时间，随着药物剂量的增减实验对象表现为性质的变化，以阳性或阴性（即死亡或存活）的方式表现出来，呈质反应的量效关系。在实验中，若以给药剂量分组，以阳性反应百分率为纵坐标，以剂量为横坐标作图，则可得到该质反应的量效曲线。若按照随剂量增加的累计阳性反应百分率作图，便能得到一个典型的不对称“S”曲线（图1A）。若把剂量转换成对数剂量，则会成为对称的S 形曲线（图1 B）。若再将纵坐标死亡率转换成机率单位，横坐标仍用对数剂量，量效曲线可模拟出一条直线（图1 C），这样便能更准确的计算LD50。图1死亡率、剂量与机率单位的关系A．死亡率与剂量的关系 B．死亡率对数剂量的关系 C．机率单位与对数剂量的关系在正态累积函数中有，令P=u+5，则P=，P则称为概率单位，整合累计函数的回归分析也称概率单位分析或probit分析，于是可得下表：表3：P值与累计频率对应值P值累积频率（y，%）3.725.006.2810.050.090.0故P值3.72、5、6.28所对应的累积频