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乙型肝炎治疗性疫苗研究进展 首都医科大学附属北京佑安医院 陈新月 在成人急性乙型肝炎患者康复后多表现出针对HBV核衣壳、多聚酶和包膜蛋白的多克隆和多特异性辅助细胞和细胞毒性T细胞应答。同样可以在慢性感染后自发恢复（）IFNα治疗有反应的患者中出现类似情况。但这些细胞应答在慢性HBV感染患者体内非常弱甚至检测不到。通过将携带HBV抗体的捐献者的骨髓移植给慢性HBV感染患者，并使得后者HBV清除的研究使得有关免疫疗法的概念得到验证。基于此，新的免疫疗法——治疗性疫苗，目的即以诱导或刺激CD4+和CD8+T细胞应答为靶向，同时还将诱导炎性细胞因子从而控制病毒的复制。这些试验方案主要以商业化重组抗乙肝疫苗、多肽疫苗和DNA疫苗为基础，其中可同时包括或者不包括药物调控的免疫应答。 蛋白疫苗 蛋白疫苗由直径22nm的空病毒颗粒构成，并含有HBsAg。这些蛋白疫苗包含一个、两个或者三个由酵母或者其他真核细胞产生的HBV包膜蛋白。这些疫苗主要用于预防，对于保护感染母亲所生的儿童也同样有效。这些疫苗包含氢氧化铝，其可作为佐剂诱导Th2型免疫应答并增加保护性抗体的生成。一系列试验和对照性研究已经证明，蛋白疫苗对于治疗慢性乙型肝炎可能是有效的。 早期一项研究曾显示，治疗性疫苗GenHevacB?（Aventis PasteurFrance）50％受试者的病毒复制降低。然而，这一结果在随后的多中心研究中并未得到证实。该研究总共入组了118名慢性乙肝患者，按照试验设计分为三组：非疫苗组、疫苗Recombivax?（Merck Sharp Dohme-ChibretFrance）GenHevacB?组。在疫苗治疗开始后6个月，即第3次肌肉注射（20ug）3个月，疫苗治疗组的病毒DNA转阴比率高于对照组（15vs 2.7％，p=0.038）200pg/ml的受试者所获得的结果最好。遗憾的是，1年后，两组受试者在病毒载量转阴比率、eAg血清转换率方面没有显著性差异。然而另一项研究显示，疫苗确实可以使eAg血清转换更为迅速。在该研究中，对27名疫苗诱导产生免疫应答的受试者进行的分析显示，1/4的患者出现了对病毒包膜具有特异性的CD4+T淋巴细胞调控产生的大量IFN-γ。相比之下，43名慢性乙肝病毒感染的儿童在接受每间隔1个月注射20ug GenHevacB?疫苗治疗3次后，在病毒复制或eAg血清转换方面并没有显著效果。在该研究中，平均年龄约10岁的儿童其病毒载量超过了2000pg/ml。这一因素与围产期感染可能是造成其缺乏应答的主要原因。另一项基于同一疫苗试验方案的研究显示，在31名表面抗原阳性而HBV DNA阴性的慢乙肝非复制携带者中，GenHevacB?疫苗可以使其中3人的表面抗原清除并且出现表面抗体。由此可以证明，该疫苗可以刺激慢性HBV非复制携带者免疫应答的生成。 另一项在19名具有病毒复制的慢性HBV携带者中进行的研究显示，经过每3个月一次连续6次注射Meinyu抗乙肝疫苗（EIJI Dairies Corporation，Japan）31％在末次注射后1年半时仍可以检测到增值性T细胞应答。另外有6名患者在缺乏细胞毒性T细胞活动的情况下，可以检测到大量的IFN—y和TNFα生成。 在接受Hepacare?（Medeva LtdUK）（3个HBV包膜蛋白）11名慢性HBV携带者中，该疫苗使其中10名患者出现了针对包膜抗原具有特异性的增殖性T细胞应答。然而，该应答与针对核衣壳抗原所产生的增殖性T细胞应答是各自独立的，而且没有检测到直接针对病毒感染的靶细胞的细胞毒性活动，即便在5名对疫苗有反应的患者中也是如此。疫苗组患者与对照组患者唯一有统计学意义的是，前者的淋巴细胞产生了更多的IL-5（Th2细胞因子） 在最近一项研究中，42名伴有或不伴有病毒复制的慢性HBV携带者接受了与Hepacare?类似的一种疫苗治疗（BioHep BBioTechnology General Ltd，Israel）3次总共5-6个月。在治疗过程中，36％的患者病毒载量显著降低，26％出现了eAg血清转换，其中大部分患者的肝脏组织学改善明显。研究同时发现了增殖性和细胞毒性应答的增加，IFN-y生成的增加，以及IL-10生成的减少。更明显的是，自然杀伤细胞（NK）HBV感染过程中被激活并通过分泌IFN-y抑制病毒复制。 另一类疫苗由重组HBsAg和抗HBs免疫球蛋白组合构成，由此形成了抗原—抗体免疫复合物。这些复合物可以通过增加抗原被抗原提呈细胞（APCs）sAg的免疫原性效果，因此增加HBs特异性T细胞的产生。该方法目前已经用于14名伴有病毒复制的慢性HBV携带者。在这些患者中分别有64.3％和43％达到了病毒DNA不可测和eAg消失。