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亲水色谱法原理及应用 2009-10-22 三、高效液相色谱仪流程图 高压泵---心脏 检测器—眼睛 色谱柱-关键 高效液相色谱检测器—眼睛 高效(压)液相色谱法 反相高效液相色谱 正相高效液相色谱 离子交换高效液相色谱 离子对色谱 凝胶液相色谱法 亲水(作用)色谱法 均由色谱柱来决定 应用范围 液相色谱法最常用的有反相液相色谱法 ，采用 C18、C8柱，适合于中等极性化合物的分离; 弱极性的化合物需用正相液相色谱法；对于强极性的化合物，如糖类、生物胺、氨基酸、河豚毒素、维生素等C18、C8柱上往往不保留或保留很少，在死时间附近出峰，常用的方法有离子对色谱法，而离子对色谱法柱平衡时间长，离子对试剂往往对色谱柱有影响。 亲水(作用)色谱法（hydrophilic interaction chromatography ，HILIC） 属含水的正相色谱法，主要采用硅胶、氰基、胺基和二醇等色谱柱，以高比例的乙腈-水体系（乙腈比例50-95%）作为流动相，化合物按极性从小到大次序出峰，特别适合于反相色谱柱不保留的强极性碱性化合物的分离, 特别适合于质谱的分析。 反相色谱法很好的补充 固定相 硅胶、胺基、酰亚胺（带电荷）、二醇（中性）、内盐（Zwitterionic）等色谱柱 保留机理：氢键、离子间相互作用 保留机理 流动相 洗脱能力： 水甲醇乙醇丙醇乙腈丙酮 高比例乙腈－水，乙腈含量（50%-95%）, 流动相中不能无水 梯度洗脱：从低水高比例乙腈开始到低比例乙腈 出峰次序 简化样品前处理步骤－SPE洗脱液直接进样 应用 三聚氰胺的分离 河豚毒素的分离 谢 谢！ * 1．贮液罐（滤棒，可滤去颗粒状物质） 2．高压泵（输液泵） 3．进样装置 4．色谱柱——分离 5．检测器——分析 6．废液出口或组分收集器 7．记录装置(工作站) 高压输液泵 恒流泵 恒压泵 注射型泵 往复型泵 双泵头往复式柱塞泵 双柱塞往复式串联泵 四元泵 二元泵 紫外检测器 二极管阵列检测(PDA,DAD) 折光指数检测器 电化学检测器(电导,安培,库仑) 荧光检测器 蒸发激光检测器 质谱 出峰次序与反相色谱相反，即极性大的化合物后出峰，极性小的化合物先出峰 SPE柱活化 上样 淋洗 用高比例乙腈洗脱 糖醇类分离 单糖类分离 * * *