分析化学 实验九 荧光分光实验.ppt

实验九 荧光法测定硫酸奎尼丁 1.分子荧光分析法简介 荧光(fluorescence) :物质接受光子能量后,被激发,从激发态的最低振动能级返回基态时发射的光. 荧光分析法:根据物质的荧光谱线位置及强度进行物质鉴定和含量测定的方法 2.应用 药物研制： 组合化学 药物分析： 可卡因、吗啡、鸦片碱、巴比妥类、酚噻 嗪、阿托品、异烟肼、利血平、色胺、阿司匹林、青霉素、四环素等药物的分析 VARIAN荧光分光光度仪 1.硫酸奎尼丁的分子结构特征 硫酸奎尼丁属生物碱类抗心率失常药,其分子具有喹啉环结构,可产生较强的荧光,可直接用荧光法测定其荧光强度,由校正曲线求出回归方程进而求出试样中奎宁的浓度. 2.定量依据与方法 荧光定量分析 1.仪器和试剂: 仪器:荧光分光光度计,刻度吸管,容量瓶 试剂:0.1μg/ml硫酸奎尼丁(仪器室), 100μg/ml硫酸奎尼丁标准溶液, 0.5mg/ml硫酸奎尼丁试样, 0.05mol/l稀硫酸溶液 2.实验步骤: 1.标准溶液的制备: 精密吸取硫酸奎尼丁标液(100μg/ml,0.05 mol/L硫酸溶解)1.0、2.0、3.0、4.0及5.0ml分别置于50ml容量瓶中,用0.05mol/L硫酸稀释至刻线,摇匀,制得对照品的标准系列溶液,并计算浓度. 2.待测试样溶液的制备: 吸取硫酸奎尼丁试样液1.0ml,于50ml容量瓶中,用0.05mol/L硫酸稀释至刻线,摇匀,得待测试样溶液. 3.测定: (1)用0.1ug/ml的硫酸奎尼丁测定激发光谱和发射光谱: 开机—打开光谱扫描工作站--方法建立—调零--激发光谱的测定—发射光谱的测定—打印结果 (2)校正曲线法测定试样溶液的浓度: 打开浓度测定工作站--方法建立--校正曲线的测定--试样溶液的测定—打印结果--关机 1.溶液配制过程中注意容量仪器的规范操作和 使用 2.测定顺序为由低到高浓度,以减少测量误差 3.进行校正曲线测定和试样时,应保持仪器参数的一致 思考题 1荧光分光光度计为什么要设置两个单色器? 2.测量试样溶液、标准溶液时，为什么要同时测定硫酸的空白溶液？ 3.荧光分光光度计和紫外分光光度计有哪些不同点? 板书说明 * * 分析化学教研室 分析化学实验 S2 S1 S0 T1 发 射 荧 光 发 射 磷 光 系间跨越 内转换 振动弛豫 l 2 l 1 l 3 l ?2 T2 荧光与磷光的比较: 荧光：10-7～10 -9 s, 第一激发单重态的最低振动能级→基态； 磷光：10-4～10s； 第一激发三重态的最低振动能级→基态； 1. 特点 （1）灵敏度高 比紫外-可见分光光度法高2～4个数量级； （2）选择性强 既可依据特征发射光谱，又可根据特征吸收光谱； （3）试样量少 缺点：应用范围小。 2.荧光分析法的应用 (1)无机化合物的分析 与有机试剂配合物后测量,可测量约60多种元素 (2)生物与有机化合物的分析 免疫荧光技术 有些荧光染料可以和免疫球蛋白结合而不破坏抗体的免疫活性。这种以荧光标记的抗体溶液可以作为特异性试剂，使免疫学技术和荧光分析方法相结合，进行免疫细胞学的研究。这种方法具有荧光分析的敏感性和免疫反应的特异性。 (3) 新药研制和药物分析 (4)其他 环境、自来水和污水水质监测 食品科学:食品添加剂、维生素含量和霉素等的分析 化学、化工和材料科学 常规分析、新化合物的光化学行为研究等无机离子及其配合物的分析 晶体材料的共振荧光 1. 实验目的 2. 实验原理 3. 实验内容 4. 注意事项 本 实 验 内 容 1.熟悉VARIAN荧光分光光度计的原理和使用 2.掌握激发光谱和发射光谱的概念及测定方法 3.掌握用标准曲线法进行荧光定量分析 实验目的 荧光分光光度计基本流程如图： 光谱扫描的实现: 仪器有两套光栅分光系统，根据激发和发射光栅动的形式可形成两种光谱： 激发光谱：激发光栅转动 发射光谱：发射光栅转动 Light source ? excitation ? emission Sample Detector Monochromator Monochromator 荧光物质的激发光谱 固定发射光波长.以不同波长的入射光激发荧光物质,化合物发射的荧光强度F与入射光波长的关系曲线λ 200 250 300 350 400 450 500 nm ? excitation ? emission Sample Detector Monochromator Monochroma