固态菌种生产技术操作规程.doc

固态菌种生产技术操作规程 菌种是食用菌生产的基础，只有优良的菌种才可能有好的收成。菌种一般分为母种、原种或栽培种3级。无论制作哪一级菌种，关键应强调无菌观念，严格按照无菌技术要求进行操作。固态菌种生产技术操作规程如下： 1 范围 本标准规定了食用菌菌种的定义、操作规程、菌种质量标准以及标志、贮存、运输。本标准适用于各种食用菌母种、原种、栽培种。 2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效，所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准必威体育精装版版本的可能性。 GB/T 12728-91 食用菌术语 DB33.B39.063-90 食、药用菌菌种质量标准 3 定义 3.1 母种（一级菌种，俗称试管菌种） 由孢子、子实体组织、耳木或基质菌丝分离纯化，并在琼脂培养基上繁殖的菌种。 3.2 原种（二级菌种） 由母种移植到固体培养基繁殖的菌种。 3.3 栽培种（三级菌种，俗称生产种） 由原种移植扩大的菌种。 3.4 培养基 培养物生长所需营养物质的液体或固体混合物。 3.5 移植 将菌种从一种基物移接到另外的培养物中扩大培养的过程。 3.6 接种 将菌种移植在培养基物中的方法。 3.7 无菌 不含活杂菌体的状态。 4 菌种操作规程 4.1 母种操作规程 母种的制作大致经过以下几个过程：培养基配制→培养基灭菌→子实体分离或耳木分离或孢子分离→培养→转管纯化培养→母种。 4.1.1 培养基制作 根据不同食用菌的不同营养需要配制不同的培养基。常用的配方有： ①土豆葡萄糖琼脂培养基(简称PDA培养基) 土豆(即马铃薯)200克、葡萄糖20克、琼脂(凝固剂)20克。 ②土豆蔗糖琼脂培养基(PSA培养基) 土豆200克、琼脂20克、蔗糖20克、水1000毫升。 ③土豆胡萝卜琼脂培养基(PCA培养基) 土豆20克、胡萝卜25克、琼脂20克、水1000毫升。 ④土豆琼脂培养基(PA培养基) 土豆250—300克、琼脂20克、水1000毫升。 4.1.2 容器 试管，试管应保持清洁、干燥、无菌。 4.1.3 灭菌 因为自然界里到处有微生物的存在，如空气、所有原料、水以及一切用具和器具的表面，这些微生物对食用菌菌种而言，都属于有害菌，即通常所说的杂菌。我们制作的菌种，要求绝对不能染上杂菌，所以必须进行严格灭菌。①高压蒸气灭菌 即用高压灭菌锅，通过加热增加锅内压力，使蒸气温度升高到120℃以上，在短时间内杀死一切微生物和它们的芽抱及抱子。原种用量较栽培种少，一般小批量生产使用这种灭菌方法，灭菌时间在1.5公斤/平方厘米的压力下，维持在0.5～1小时。 ②加热灭菌法 近年来普遍使用的一种方法是常压一次灭菌法，所需设备简单、投资少、成本低，适合我国农村使用。此法只要砌一个锅灶，买一口大锅，做几个蒸笼就可以了。把待杀菌的物品放入蒸笼里，从上气开始，保持蒸煮6～8小时，即可达到灭菌的目的。 ③紫外线灭菌法 开紫外灯30～40分钟，基本上可达杀菌目的，距照射物的距离以不超过1.2米为宜。注意紫外线对人体有伤害作用，所以不能用眼睛直视开着的紫外线灯，也不能开着灯工作。 4.1.4 母种分离 即通常将食用菌的子实体、土壤中的菌根、菌素分离或进行耳木分离或孢子分离，然后在培养基上培养，得到母种。作为分离母种的种菇、种耳，必须从高产、稳产、适应性强的优良品系群体中，通过挑选、对照、评审，然后择优选取个体健壮，朵形圆正，外表清洁，无病虫害的种菇或种耳，作为分离的母体。具休分离方法有以下几种①孢子弹射法 分离前把子实体用无菌水冲数遍后，用滤纸吸干表面水分。然后在接种箱或无菌室内。把种菇的菌褶朝下，用不锈钢丝勾住，悬挂在二角瓶内培养基的上方。勿使接触到培养基或四周瓶壁。瓶口用棉花塞紧。置于该菌适宜的温度下培养。一般12～20小时，菌褶上的孢子就会散落在培养基上，形成一层白色或其他颜色的粉未状孢子印。香菇、金针菇、银耳的孢子为白色，平菇极淡紫色，蘑菇、草菇为褐色。然后用无菌接种针沾取少量的孢子，在试管中的琼脂斜面培养基上接种待孢子萌发，生成菌落时，选孢子萌发早，长势好的菌落进行转管培养即得母种。 ②组织分离法 食用菌子实体，实质就是一团分化了的菌丝体，所以可从子实体中切取一小块放在培养基上培育，就可获得母种。这种分离法属于无性繁殖。具体操作把经过筛选的优良品系的菇、耳子实体的组织块，作为分离材料。淋雨或吸水的种菇、种耳容易污染菌，一般不能作为分离材料。分离时，把种耳撕开，在菌盖和菌柄交界处或菌褶处，切取一小块组织作为接种物。银耳可以取耳片一点即可。为了减少带杂菌的机会，切取组织块时应尽量小些，可得到的纯度高的菌种。然后接到斜面试管培养基的中央，在适宜的温度下培养，当组织块上长出菌丝，并向培