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亿学与佳物：程2005．N。1 Chemistry＆Bioengineering Mn-SOD的纯化方法研究 刘明胜。胡昆，陈红漫，阚国仕 (沈阳农业大学生物科学技术学院，辽宁沈阳110161) 5110 摘要：以嗜热芽孢杆茵B 2所产MnSOD为研究对象，对其纯化方法进行了研究，用碱处理的方法替代了 传统的硫酸镂分级沉淀蛋白的方法；通过对金属螯舍层析中二价金属离子的选择厦洗脱液pH的选择，初步建立了一套 适合分离纯化Mn—SOD的金属螫合层析体系．为实际生物产品的分离奠定了基础。 关键词：嗜热芽孢杆茵B．sll0—2；Mn—SOD；碱处理；金属螯合层析；金属离子；pH 03 中图分类号：Q949 5425(2005)1l0033 文献标识码：A 文章编号：1672 超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，简称1．4方法 SOD，EC．1．15．1．1)是一类生物体内广泛存在的能防l_4．1粗酶液的制备 御氧化损失的金属酶“1，具有抗衰老、防辐射及治疗炎 活化斜面菌种，经二级种子培养基培养后按5％ 症等一系列功能，已被广泛应用于食品及医疗保健行 接种至发酵培养基，50℃恒温摇床培养至稳定期，离心 业”o。传统的SOD纯化方法比较繁琐且费时费力，不收集菌体，称重。菌体按1：10的比例悬浮于 利于规模化生产和酶活的保存。金属螯合层析是近 0．05 7．8磷酸缓冲液中，在冰浴中用超 tool·L“pH 20年发展起来的一项新型分离技术，已逐渐成为分离 声波细胞粉碎机破碎细胞，每次处理5s，间隔7s，共处 纯化蛋白质等生物工程产品最有效的技术之一。作者 理12rain，在4℃下6000r·rain_1离心20rain，获得的 拟通过对嗜热菌B．s110—2中所产Mn—sOD的纯化方上清液即为粗酶液。 法的研究，建立一套简便快捷且有利于规模化生产 1．4．2粗酶液的前处理 SOD的新方法。 1．4．2．1硫酸铵分级沉淀 SOD粗酶液先用40％硫酸铵沉淀，离心，取上清 1 实验 液，再用90％硫酸铵沉淀，8000r·min_1离，020rain，弃 tool·L_1 1．1菌株B．s110-2 去上清液，将沉淀用适量0．05 7．8磷酸二 pH 由长白山温泉土中筛选获得的能高产Mn—SOD氢钠一磷酸氢二钠缓冲液重溶，以蒸馏水透析过夜。将 r·min1离一C,20 的嗜热芽孢杆菌。 透析液8000 min后，留取上清液。 1．2试剂 1．4．2．2碱处理 mL0．2 葡聚糖凝胶(；100，Whatman公司；Chelating向100mL粗酶液巾加入20 mol·L叫氢 Fast Sepharos