诱导人脐血间充质干细胞分化为多巴胺能神经元样细胞的研究-生物通.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（３）：１～８ 檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 殏檪檪 研究报告殏檪 檪檪檪檪檪檪檪檪 诱导人脐血间充质干细胞分化为 多巴胺能神经元样细胞的研究 １ １ ２ １ １ 林　燕 　孙海梅 　杨　慧 　曾晓蓓 　季凤清 （１首都医科大学组织胚胎学教研室　北京　１０００６９　２首都医科大学神经生物学教研室　北京　１０００６９） 摘要　目的：探讨人羊膜上皮细胞条件培养液（ＡＣＭ）及 ＳＨＨ，ＦＧＦ８诱导人脐血间充质干细胞 （ＣＢＭＳＣｓ）分化为多巴胺（ｄｏｐａｍｉｎｅ，ＤＡ）能神经元样细胞的作用及机制。方法：利用沉降红细 胞、密度梯度离心和贴壁筛选法纯化ＣＢＭＳＣｓ，加入ＡＣＭ及ＳＨＨ，ＦＧＦ８分为ＣＯＮ，ＡＣＭ，ＳＨＨ＋ ＦＧＦ８，ＡＣＭ＋ＳＨＨ＋ＦＧＦ８四组诱导４８ｈ后，免疫细胞化学染色鉴定分化细胞的ＤＡ神经元表型。 应用高压液相色谱技术测定细胞培养上清中ＤＡ含量，并应用ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ方法观察ＤＡ能神经 元发育过程中的相关基因Ｅｎ１，Ｆｏｘａ２，Ｌｍｘ１ｂ，Ｇｌｉ１，Ｐｉｔｘ３，Ｎｕｒｒ１以及Ｎｇｎ２的表达。结果：加诱导 剂诱导４８ｈ后，各诱导组的ＴＨ和ＤＡＴ的表达量均比对照组高。早期的转录因子Ｅｎ１，Ｆｏｘａ２在各 组中均有表达；而Ｐｉｔｘ３，Ｌｍｘ１ｂ表达在各诱导组中；Ｌｍｘ１ｂ在ＡＣＭ＋ＳＨＨ＋ＦＧＦ８组中表达最高； Ｐｉｔｘ３在各诱导组中均有表达且无明显差异。Ｎｕｒｒ１，Ｎｇｎ２在 ＳＨＨ＋ＦＧＦ８组中表达很强。结论： ＡＣＭ及ＳＨＨ，ＦＧＦ８可诱导脐血间充质干细胞分化为ＤＡ能神经元样细胞，其作用机制与多巴胺 能神经元发育过程中的各种基因Ｅｎ１，Ｆｏｘａ２，Ｌｍｘ１ｂ，Ｇｌｉ１，Ｐｉｔｘ３，Ｎｕｒｒ１以及Ｎｇｎ２相关。 关键词　ＣＢＭＳＣｓ　ＤＡ能神经元样细胞　ＡＣＭ　ＳＨＨ＋ＦＧＦ８　诱导 中图分类号　Ｑ８１２ ［１］ 　　自２００１年ＳａｎｃｈｅｚＲａｍｏｓ等 报导了人脐带血单 环境关系非常密切。一方面，外周环境中神经刺激因 个核细胞经过维甲酸和神经生长因子处理后，可表达 子信号的表达可调控所产生的神经元的数量和类型， 神经元和星形胶质细胞的特异标志抗原以来，各国学 另一方面，神经干细胞内部变化影响神经干细胞对周 者陆续报道在脐带血细胞中有沉寂的神经（干）细胞， 围环境神经刺激因子的反应。这两种不同的机制包含 在细胞因子的作用下能分化为具有一定形态和结构的 ［３］ 在神经干细胞分化的全过程中 。 神经细胞，且脐带血细胞分化为神经细胞的潜能依赖 ［４］ 　　２０００年 Ｕｃｈｉｄａ等 证实培养的羊膜上皮细胞 ［２］ 于不同的周围环境及培养条件 。 （ａｍｎｉｏｔｉｃｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ，ＡＥＣ）可以合成分泌脑源性神 　　研究表明干细胞的生物学特性受所在组织的微环 经营养因子（ｂｒａｉｎｄｅｒｉｖｅｄｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ，ＢＤＮＦ）、 境等因素的影响，在不同的微环境下，某些细胞因子可 神经营养因子３（ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ３，ＮＴ３）、神经生 诱导干细胞定向分化，但是干细胞的定向分化取决于 长因子 （ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＮＧＦ）、白细胞介素１ 不同的诱导条件，细胞分化的特异性和定向性与周围 （ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１，ＩＬ１）、白细胞介素４（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ４，ＩＬ