应用单管巢式多重pcr技术检测登革病毒及分型-第二军医大学学报.pdf

第二军医大学学报 年 月第 卷第 期 ：／／ ２０１０ ２ ３１ ２ ｈｔｔ ｗｗｗ．ａｓｍｍｕ．ｃｎ 　 ｐ ｊ ·１５２ · 　　 ， ， ， ＡｃａｄｅｍｉｃＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｅｃｏｎｄ Ｍｉｌｉｔａｒ ＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔ Ｆｅｂ．２０１０ Ｖｏｌ．３１ Ｎｏ．２ ｙ ｙ ： ／ ·论 著· ＤＯＩ １０．３７２４ＳＰ．Ｊ．１００８．２０１０．００１５２ 　 应用单管巢式多重ＰＣＲ技术检测登革病毒及分型 １ ２ １ １ ２ １ 李淑华 ，方美玉 ，刘世建 ，常文军 ，王珊珊 ，曹广文  第二军医大学基础部流行病学教研室，上海 １． ２００４３３ 广州军区疾病预防控制中心微生物研究室，广州 ２． ５１００００ ［摘要］ 目的 建立一种单管巢式多重 ＲＴＰＣＲ方法，以用于临床对于不同型别登革病毒混合感染的检测并分型。 方 　　 　 　 法 将 型登革病毒 混合，首先用 型病毒通用外引物进行一步法 ，然后以混合病毒 产物为 １ ４ ＲＮＡ １ ４ ＲＴＰＣＲ ＲＴＰＣＲ ～ ～ 　 模板，在同一反应管内同时加入 对（ 条）型特异性引物进行巢式多重 ，结果用 染色的 琼脂糖凝胶电泳观察；并将 ４ ５ ＰＣＲ ＥＢ ３％ 其检测敏感性和特异性与该方法的单一病毒模板 ＲＮＡ扩增进行比较。结果 经反应条件的优化，混合病毒模板单管巢式多 　 重 可以在同一反应管内同时扩增出 条病毒特异性目的条带，分别为 、 、 、 。其敏感性和特异性与单一病 ＰＣＲ ４ ４８２ １１９２９０ ３８９ｂ ｐ 毒 的扩增相当，对模板 检测的敏感性可以达到 ／ 。 结论 该方法简便、快速、敏感、特异，可以根据 ＲＮＡ ＲＮＡ ６６．０６８ｃｏｉｅｓ ｌ ｐ