一株产钙调磷酸酶抑制剂链霉菌czw-15的筛选鉴定及发酵条件研究.pdf

微生物学通报 Dec. 20, 2015, 42(12): 2417−2425 Microbiology China © 2015 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150153 研究报告 一株产钙调磷酸酶抑制剂链霉菌CZW-15 的 筛选鉴定及发酵条件研究 吴鹏飞 周亮 刘俊麟 崔志峰* (浙江工业大学生物与环境工程学院 浙江 杭州 310032) 摘 要：【目的】筛选产钙调磷酸酶抑制剂的放线菌菌株。【方法】通过酵母报告基因(CDRE::LacZ) 高通量筛选模型与人体钙调磷酸酶试剂盒检测相结合的方法，从土壤放线菌中筛选产钙调磷酸酶 抑制剂的菌株；根据形态和培养特征、生理生化实验以及16S rRNA 基因序列比对进行菌株鉴定； 采用单因素实验和正交实验对发酵条件进行优化。【结果】从土壤中筛选得到一株产高活性钙调 磷酸酶抑制剂的放线菌CZW-15 ，经鉴定属于链霉菌属(Streptomyces) 。酵母报告基因检测显示其 发酵上清液对依赖酵母钙调磷酸酶的报告基因表达抑制活性IC50 为7.4 mL/L ，而对照药物FK506 的IC 为65 μg/L。该菌的最佳摇瓶发酵配方为(%)：玉米粉2 、酵母粉0.1 、K HPO 0.04、MgSO 50 2 4 4 0.04、NaCl 0.05 、FeSO4 0.001 ；发酵条件为：初始pH 7.5 ，温度28 °C ，转速180 r/min，装液量 50 mL/250 mL ，接种量4% ，培养时间4 d 。优化后1.5 μL 发酵上清液对依赖酵母钙调磷酸酶的 报告基因表达抑制活性达到 117%，比优化前提高4.5 倍。【结论】CZW-15 属于链霉菌属，该菌 产生高活性的抑制酵母钙调磷酸酶的活性物质。 关键词：放线菌，钙调磷酸酶，抑制剂，筛选，发酵条件 Screening, identification and fermentation conditions optimization of Streptomyces CZW-15 with inhibitory activities on calcineurin * WU Peng-Fei ZHOU Liang LIU Jun-Lin CUI Zhi-Feng (College of Biological and Environmental Engineering, Zhejiang University of Technology, Hangzhou, Zhejiang 310032, China) Abstract: [Objective] To screen actinomycetes strains with calcineurin inhibitory activity. [Methods] Actinomycetes strains with calcineurin inhibitory activity were screened by a yeast report gene (CDRE::LacZ) based high throughput screen