野生型斑马鱼胚胎中hoxd3基因mrna的表达谱.pdf

第４１卷　第１期 浙 江 大 学 学报 （医学 版 ） Ｖｏｌ４１　Ｎｏ１ 　 ２０１２年 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＺＨＥＪＩＡＮＧＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＭＥＤＩＣＡＬＳＣＩＥＮＣＥＳ） 　 ２０１２ ｈｔｔｐ： ｗｗｗ．ｊｏｕｒｎａｌｓ．ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／ｍｅｄ ＤＯＩ：１０．３７８５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８９２９２．２０１２．０１．０１２ ∥ 野生型斑马鱼胚胎中ｈｏｘｄ３基因ｍＲＮＡ的表达谱 １，２ １，３ ３ ３ ３ ３ 舒莉萍 ，何志旭 ，姚冬静 ，马健娟 ，李　涛 ，叶芝旭 （贵阳医学院，１．组织工程与干细胞实验中心，２．免疫教研室，３．儿科教研室，贵州 贵阳５５０００４） ［摘　要］　目的：为探讨ｈｏｘｄ３基因在斑马鱼发育过程中与血管形成可能的作用机制，用ｈｏｘｄ３基 因的反义ｍＲＮＡ探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交，观测ｈｏｘｄ３基因在野生型斑马鱼胚胎发育过程 中的表达情况。方法：提取斑马鱼胚胎总ＲＮＡ，经ＲＴＰＣＲ扩增斑马鱼ｈｏｘｄ３基因片段，将得到的 ２＋ ２＋ ｈｏｘｄ３基因片段和ｐＣＳ 质粒经ＥｃｏＲ 、Ｘｂａ 双酶切后插入ｐＣＳ 质粒中，挑选阳性克隆，通过双 Ⅰ Ⅰ ２＋ 酶切、菌落ＰＣＲ以及测序鉴定；将ｐＣＳ ｈｏｘｄ３重组子经ＥｃｏＲ 酶切线性化，经ＴＲＮＡ体外转录 Ⅰ ３ 体系合成地高辛标记的ｈｏｘｄ３基因的反义ｍＲＮＡ探针。用ｈｏｘｄ３基因的反义ｍＲＮＡ探针进行斑马 ２＋ 鱼全胚胎原位杂交。结果：构建和鉴定了ｐＣＳ ｈｏｘｄ３重组质粒，经斑马鱼全胚胎原位杂交检测 ｈｏｘｄ３基因的表达，发现在 Ｔｕｅｂｉｎｇｅｎ野生型斑马鱼受精后２４ｈ～７２ｈ胚胎的中脑后脑交界处以及 后脑中可以观察到ｈｏｘｄ３基因的表达。结论：ｈｏｘｄ３基因在Ｔｕｅｂｉｎｇｅｎ野生型斑马鱼胚胎发育早期 的神经系统高表达，未发现在血管生成区域的表达。 ［关键词］　寡核苷酸类，反义／遗传学；原位杂交；基因表达；斑马鱼；胚胎发育；遗传载体； 质粒／遗传学；转染；内皮，血管／细胞学 ［中图分类号］　Ｒ７８６　　［文献标志码］　Ａ　　［文章编号］　１００８９２９２（２０１２）０１００６９０６ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｏｆｈｏｘｄ３ｇｅｎｅｄｕｒｉｎｇｅａｒｌｙｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｗｉｌｄｔｙｐｅ ｚｅｂｒａｆｉｓｈｅｍｂｒｙｏｓ １，２ １，２ ３ ３ ３ ３ ＳＨＵＬｉｐｉｎｇ ，ＨＥＺｈｉｘｕ ，ＹＡＯ Ｄｏｎｇｊｉｎｇ，ＭＡＪｉａｎｊｕａｎ，ＬＩＴａｏ，ＹＥＺｈｉｘｕ（１．Ｔｉｓｓｕｅ ＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｄＳｔｅｍＣｅｌｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｅｄｉａｔｒｉｃｓ， ＧｕｉｙａｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００４，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｏｆｈｏｘｄ３ｇｅｎｅｄｕｒｉｎｇｅａｒｌｙｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｗｉｌｄｔｙｐｅｚｅｂｒａｆｉｓｈ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｏｔａｌＲＮＡｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｅｍｂｒｙｏｓｏｆｚｅｂｒａｆｉｓｈｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓｔａｇｅｓｂｙｔｒｉｚｏｌ．ＴｈｅｃＤＮＡｏｆｈｏｘｄ３ｇｅｎｅｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙＲＴＰＣＲ．ＴｈｅＲＴＰＣＲ ２＋ ｐｒｏｄｕｃｔｗａｓｌｉｇａｔｅｄｔｏｐＣＳ ｖｅｃｔｏｒｂｙ