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半制备柱：YMC ODS (250mm×10mm，5μm) 线性放大系数： =4.7 流动相：同分析型 流速：4.7ml/min (分析型HPLC为1ml/min) 进样量：1.5ml 102 4.62 PHPLC法制备 辛夷木脂素PHPLC色谱图(一次进样1.5ml，分离约需60min) HPLC色谱图 Mobile phase A：40%乙睛，6ml/min Mobile phase B：35%乙睛，4ml/min Column A：ODS(100mm×10mm, 5μm) Column B：ODS(250mm×10mm, 5μm) 六通切换阀 六通进样阀 二级PHPLC法制备 一级PHPLC色谱图： （Ⅰ、Ⅱ未分离） 二级PHPLC 在Detector A 上的色谱图： 二级PHPLC 在Detector B 上的色谱图： 二级PHPLC在Detector A上的色谱图 二级PHPLC在Detector B上的色谱图 连续进样（2mL/次/20min） 普通PHPLC 二级PHPLC 所需设备 一套PHPLC设备 两套PHPLC组合 每次分离时间 60min 20min 每次进样量 1.5ml 2ml 总分离时间 400 hr 100 hr (总进样量600ml计) 消耗乙腈总量 41.36L 20.64L (总进样量600ml计) 普通PHPLC与二级PHPLC效率比较 主要参考文献： 2. Weiquan Zhao, Tingting Zhou, Guorong Fan, Yifeng Chai, Yutian Wu. Isolation and purification of lignans from Magnolia biondii Pamp by isocratic reversed-phase two-dimensional liquid chromatography following microwave-assisted extraction. Journal of Separation Science. 2007,30,2370-2381. 1．K.霍斯泰特曼，A.马斯顿，M.霍斯泰特曼(著)，赵维民，张天佑(译)． 制备色谱技术——在天然产物分离中的应用．北京：科学出版社，2002 谢谢大家！ 中药化合物组制备技术 中药化合物组制备技术 中药有效成分(多组分)提取分离纯化的技术方法 分离制备的目的： 药效物质基础研究的需要，分离后才能测定有效成分的组成和含量，鉴定化合物的化学结构、测定理化性质和生物活性 作为原料药、合成的起始原料 作为标准品，用于中药质量控制研究 中药化合物组的分离制备 提取：得到粗提取物 经典技术：溶剂提取法，水蒸气蒸馏法 现代技术：超临界流体萃取，超声提取， 微波萃取等 纯化：精制，除去杂质 进一步分离，得到纯化合物(单体) 经典技术：萃取，沉淀，重结晶等 现代技术：色谱法，膜分离技术等 经典提取技术 溶剂提取法 水蒸气蒸馏法 溶剂提取法 溶剂的选择： 溶剂对有效成分溶解度大，对杂质溶解度小； a.水； b.亲水性有机溶剂：甲醇、乙醇等； c.亲脂性有机溶剂：氯仿、石油醚等。 溶剂不能与中药的成分起化学变化； 溶剂要经济、易得、安全、低毒等。 b d.回流提取法； e.索氏提取法。 d e a.浸渍法； b.渗漉法； c.煎煮法； 提取方法 1-安全管；2-水蒸气导入管；3-馏出物出口管；4-接液管 适用于能随水蒸气蒸馏而不被破坏、与水不相混溶或仅微溶的中草药成分(如挥发油类)的提取。 水蒸气蒸馏法 经典分离纯化技术 萃取法，沉淀法，盐析法，透析法，重结晶…… 经典方法存在的问题 费时：处理时间长； 费力：操作步骤多，自动化程度低； 低效：损失大，产率低； 大量使用有毒有机溶剂； 样品多加热，不稳定。 现代提取技术 超临界流体萃取，加速溶剂萃取，超声提取，微波提取，酶萃取，(半)仿生提取… CO2相图 压 力 (atm) 73.0 温度(℃) 5.2 -5