2010年微生物限度检查法修订 PPT.ppt

* * 2010年版微生物限度检查法 增修订内容简介 ——以《中国药典》一部为例 2008.10 一、增加的内容 1、增加了贴剂 的微生物检查方法 检查方法： 取规定量供试品，去掉贴剂的保护层，放置在无菌玻璃或塑料片上，粘贴面朝上。用适宜的无菌多孔材料（如无菌纱布）覆盖贴剂的粘贴面以避免贴剂粘贴在一起。然后将其置于适宜体积并含有灭活剂（如聚山梨酯80或卵磷脂）的稀释剂中，用力振荡至少30分钟，或以其他方法制备成供试液。贴膏剂应采用薄膜过滤法进行细菌、霉菌及酵母菌计数。 2、增加了计数培养基的适用性检查 细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查，包括成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配制的培养基均应检查。 2、增加了计数培养基的适用性检查 适用性检查： 取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48hr，计数；取白色念珠菌、黑曲霉各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置20～25℃培养72hr，计数；取白色念珠菌50～100cfu，注入无菌平皿中，立即倾注酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，平行制备2个平皿，混匀，凝固，置20～25℃培养72hr，计数。同时，用对应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 2、增加了计数培养基的适用性检查 结果判定 ：被检培养基的菌落数与对照培养基菌落数相比大于70%，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。判该培养基的适用性检查符合规定。 5、增加了常见干扰物的中和剂或灭活方法 微生物限度检查法.pdf 6、增加了没有办法消除供试品中的抑菌作用 的情况及相关规定 若没有适宜的方法消除供试品中的抑菌作用，那么验证试验中微生物回收的失败可看成是因供试品的抗菌活性引起的，同时表明该供试品不能被试验菌污染。然而，供试品也可能仅对试验用菌株具有抑制作用，而对其他菌株没有抑制作用。因此，根据供试品须符合的微生物限度标准和菌数报告规则，在不影响检验结果判断的前提下，应采用能使微生物生长的更高稀释级的供试液进行方法验证试验。若验证试验符合要求，应以该稀释级供试液作为最低稀释级的供试液进行供试品检验。 6、增加了没有办法消除供试品中的抑菌作用 的情况及相关规定 计数方法验证时，若采用上述计数方法总存在一株或多株试验菌的回收率达不到要求，那么选择回收情况最接近要求的方法和试验条件进行供试品的检测。 7、细菌、霉菌及酵母菌计数检查增加了阳性对照 阳性对照 除另有规定外，抗真菌供试品以白色念珠菌为对照菌，其它供试品以金黄色葡萄球菌为对照菌，按供试品的细菌（霉菌和酵母菌）计数方法，测定试验菌在该供试品中的回收率。回收率应不小于70％。否则实验结果无效，应重新确定计数方法。 8、增加了薄膜过滤法每张滤膜冲洗量的规定 每张滤膜每次冲洗量不超过100ml，总冲洗量不得超过1000ml 滤膜直径一般为50mm，若采用其它直径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整。 9、增加了选择滤膜材质的原则  选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微生物的充分被截留。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。 10、增加了控制菌检查用培养基的适用性检查 控制菌检查用的培养基应进行培养基的适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配制的培养基均应检查。检查项目包括培养基的促生长、指示和抑制特性能力。 微生物限度检查法.pdf 10、增加了控制菌检查用培养基的适用性检查 增菌培养基促生长能力检查：分别接种不大于100cfu的试验菌（见表2）于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。 10、增加了控制菌检查用培养基的适用性检查 固体培养基促生长能力检查：取试验菌各0.1ml（50～100cfu）分别涂布于被检培养基和对照培养基平板中，每种培养基平行制备2个平皿，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养，计数。被检培养基的菌落数与对照培养基菌落数相比应不小于70%，且生长的菌落形态应一致。 10、增加了控制菌检查用培养基的适用性检查 培养基抑制能力检查：划线接种试验菌（见表2）于被检培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度和时间下培养，试验菌应不得生长。 10、增加了控制菌检查用培养基的适用性检查