哈维氏弧菌外膜蛋白ompk基因的克隆及原核表达.pdfVIP

　第 30 卷第 1 期 水 　产 　学 　报 Vol . 30 , N o . 1 　 2006 年 2 月 　 　　　　　　　　 　　 　　　　　　 　　　　　 Feb . ,2006 　 J OURNAL OF FISHERIES OF CHINA ( ) 文章编号 : 1000 - 0615 2006 01 - 0009 - 06 哈维氏弧菌外膜蛋白Omp K 基因的克隆及原核表达 1 ,2 2 1 ,2 1 ,2 1 ,2 张崇文 , 　于 　涟 , 　毛芝娟 , 　褚武英 , 　钱荣华 ( 1. 浙江大学生物医学工程学院,浙江 杭州 　310027 ; 2. 浙江大学动物预防医学研究所 ,浙江 杭州 　310029) ( ) 摘要 :根据哈维氏弧菌外膜蛋白Omp K 的基因序列设计一对引物 ,应用聚合酶链式反应 PCR 方法 , 从分离 自 患病大黄鱼的哈维氏弧菌基因组中扩增获得一段约 800 bp 的序列 。将其克隆到 p GEMTeasy 载体 , 测序结果 证明该序列是哈维氏弧菌外膜蛋白Omp K 基因。用 PCR 方法去除其信号肽序列 , 定向克隆到原核表达载体 p GEX4 T2 构建重组表达质粒 p GEX4 TOmp K 。IPTG 诱导后能够在大肠杆菌 BL21 中高效表达分子量约为 53kD 的 GSTOmp K 融合蛋白。用纯化后的融合蛋白免疫新西兰兔获得了高效价的抗血清 。Westernblotting 分析表明, 它与从哈维氏弧菌中提取的约 27 kD 的外膜蛋白能够发生特异反应 , 提示外膜蛋白Omp K 可能是 哈维氏弧菌的重要保护性抗原之一 。 关键词 :哈维氏弧菌; 外膜蛋白; Omp K; 原核表达 中图分类号 :Q78 ; Q936 　　　文献标识码 :A Cloning and expression of Omp K gene from Vibrio harveyi in Pseudosciaena cr ocea 1 ,2 2 1 ,2 1 ,2 1 ,2 ZHAN G Chongwen , YU Lian , MAO Zhij uan , CHU Wuying , QIAN Ronghua ( 1. College of B iomedical