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利用改进的手工克隆技术生产转GFP基因猪克隆胚胎
HEREDITAS (Beijing) 2011 5 , 33(5): 527―532
ISSN 0253-9772 研究报告
DOI: 10.3724/SP.J.1005.2011.00527
利用改进的手工克隆技术生产转GFP 基因猪克隆胚胎
1,2 2 3 3 3 2 2,3 1 1
张鹏 , 杨珍珍 , 窦红伟 ,李伟杭 , 律波 , Bolund Lars , 杜玉涛 , 谭萍萍 , 马润林
1. , 100101;
2. , 518083;
3. , 518083
通过体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer, SCNT)培育转基因动物新个体是当前被广泛使用的技术
之一, 但其生产成本高和转基因囊胚形成率低在很大程度上制约了该技术的应用。文章报告对该技术的一些改
进以提高其成功率并降低成本。首先将增强型绿色荧光基因(EGFP) 导入猪胎儿成纤维细胞中, 通过荧光观察
EGFP 的表达来筛选适合做细胞核移植的体细胞。这样避免了外源EGFP 基因虽已整合至猪基因组但不表达的
情况, 保证供体细胞 100%是表达目标蛋白(绿色荧光蛋白) 的细胞; 然后利用新一代体细胞核移植技术——手工
克隆技术(Handmade cloning, HMC)将供体细胞与卵母细胞融合生产胚胎。共收集了4 个批次378 个肉用家猪的
卵母细胞, 经体外培养成熟后手工去核得到266 个去核卵母细胞, 与EGFP 细胞融合后获得127 个重构胚胎, 将
重构胚胎体外培养到 144 h, 得到转基因囊胚65 个, 平均囊胚率为52.1±8.3% 。与传统SCNT 相比, HMC 不仅
操作简便, 而且能大幅提高核移植细胞的囊胚率。更为重要的是, 改进的手工克隆技术摆脱了昂贵的显微操作
仪, 为产业化生产转基因动物提供了新的实用基础。
手工克隆; 体细胞核移植; 绿色荧光蛋白; 克隆胚胎
Production of porcine blastocysts expressed EGFP by handmade
cloning
1,2 2 3 3 3
ZHANG Peng , YANG Zhen-Zhen , DOU Hong-Wei , LI Wei-Hang , LV Bo , Bolund
2 2,3 1 1
Lars , DU Yu-Tao , TAN Ping-Ping , MA Run-Lin
1. Institute of genetics and developmental biology , Chinese Acdemy of Science, Beijing 100101, China;
2. Beijing Genomics Institute (BGI-ShenZhen), Shenzhen 518083, China;
3. BGI ARK Biotechnology Co., Ltd , Shenzhen 518083, China
Abstract: Production of transgenic animals via somatic cell nuclear transfe
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