脑梗死与基因组DNA甲基化的相关性研究.docVIP

精品论文 参考文献 脑梗死与基因组DNA甲基化的相关性研究 延边大学附属医院 133000 摘要：目的 探讨脑梗死与基因组DNA甲基化的相关性，为脑梗死的诊治提供新的途径和方法。方法 采用病例-对照研究方法，选取脑梗死患者53例，脑梗死患者50例，用基因组DNA甲基化定量检测试剂盒检测脑梗死组与正常对照组的甲基化水平。结果 脑梗死组与正常对照组基因组DNA甲基化水平未见显著差异。结论 结合本次实验结果不能认为基因组DNA甲基化水平与脑梗死相关。 关键词：脑梗死；表观遗传；基因组DAN甲基化 脑梗死是各种原因所致脑部血液供应障碍，导致局部脑组织缺雪、缺氧性坏死，而出现行营神经功能缺损的一类临床综合症。具有致死率、致残率、复发率高的特点，其发病率也在逐年上升，给社会和家庭带来严重的负担[6]。脑梗死的预防和诊治成为当前面临的重要难题。脑梗死高同型半胱氨酸血症是脑梗死的独立危险因素，是近几年的研究热点。同型半胱氨酸是甲硫氨酸循环的重要中间产物，主要生物功能使为物质合成提供甲基[5]。DNA甲基化是表观遗传学的主要机制之一，由S-腺苷甲硫氨酸提供甲基，在DNA甲基转移酶的催化下使CPG二核苷酸5，端的胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶。基因组甲基化的核心机制通常包括基因启动子区CpG岛甲基化和基因组总体甲基化改变。大量研究证实了肿瘤细胞中基因组总体低甲基化，伴随特异性基因DNA高甲基化[7]。20世纪90年代末首次有学者提出DNA总体甲基化与动脉硬化的发生密切相关，DNA甲基化的异常改变可能是动脉粥样硬化发生的早期标志[8]。动脉粥样硬化是脑梗死的主要发病机制，但基因组DNA甲基化与脑梗死的相关性研究很少，本次次实验旨在通过检测两组样本的DNA甲基化水平差异，判断有无统计学意义，为脑梗死提供新的诊治途径 1材料与方法 1.1样本来源：选取延边医院神经内科脑梗死住院患者，在患者知情同意的前提下采集次日空腹肘静脉血2ML，及同时期延边医院门诊体检患者血标本2ML，EDTA抗凝，-40℃保存备用。 1.2主要仪器与试剂： （1）紫外分光光度计（Bio Photometer）德国eppendorf公司 （2）低速自动平衡离心机LDZ5 北京雷勃尔离心机有 （3）智能恒温水浴锅 郑州长城科工贸有限公司 （4）涡旋混合器 康健医疗用品有限公司 （5）酶标仪 北京天普新桥技术有限公司 （6）立式压力蒸汽灭菌器 海博迅实业有限公司医疗设备厂 （7）精密鼓风干燥箱BAO-250A 施都凯仪器设备上海有限公司 （8）全血基因组DNA提取试剂盒DNO3 北京艾德莱生物科技有限公司 （9）DNA甲基化定量检测试剂盒A-P-1034 武汉艾美捷生物科技有限公司 （10）70%乙醇（由无水乙醇配制） 天津市科密欧化学试剂有限公司 （11）异丙醇 天津市科密欧化学试剂有限公司 1.3实验方法：严格按照全血基因组DNA提取试剂盒（北京艾德莱生物）说明提取基因组DNA，调整浓度为1g/L，然后按照DNA甲基化定量试剂盒（武汉艾美捷生物）测定两组样本的甲基化水平，按以下公式计算DNA甲基化水平： 5-mC%= （样本OD-ME3OD）divide;S times;100% （ME4OD-ME3OD）times;2divide;P ME3为阴性对照 ME4为阳性对照 S代表DNA样本的输入量：单位 ng P代表阳性对照（ME4）的量：单位 ng 2是一个代数，将5-mC在阳性对照中的含量标准化达到100%，由于阳性对照只包含50%的5-mC。 2.数据处理：使用SPSS17.0统计软件，计量资料以均数plusmn;标准差（plusmn;s）表示，采用t检验；以p＜0.05为差异有统计学意义。 3.结果： 4.讨论： 大多数脑卒中是遗传因素与环境危险因素共同作用的结果。环境因素已报告200多种，已明确的危险因素包括老龄、男性、吸烟、饮酒高血压和卒中家族史等[1].随着人类基因组计划的完成，仍有很多问题无法解释，越来越多的学者把注意力转移到表观遗传学上。表观遗传