分子生物学基本研究方法02.pdf

5.2.4 SNP技术及应用 概念： Single Nucleotide Polymorphism， SNP，单核苷酸多态性。指基因组DNA序列中 由于单个核苷酸（A,T,C和G）的突变引起的 多态性变异。 一个SNP表示在基因组某各位点上有一 个核苷酸的变化。 源于单个碱基的转换或颠换。转换占 2/3左右，在CG序列上出现较多，多是C转 换为T. 在人类基因组中，SNP 变异频率大于1 %, 每300∼1000 个碱基对就有一个SNP ,一 个人至少携带3 00万个SNPs。 SSCP Analysis: Single-Strand Conformation Polymorphism Analysis A. SSCP原理模式图 依据原理：单链DNA分子采用序列特异的构象。由单碱基替代引起的构象 改变，可通过检测其在非变性聚丙烯酰胺胶中的迁移率的变化而捡出。 用途： 寻找和研究SNP有助于解释个体的表型 差异、不同群体和个体对疾病,特别是对复 杂疾病的易感性以及对各种药物的耐受性 和对环境因子的反应。是人类基因组计划 的内容和目标之一。 例 举 用 应 学 医 法 在 SNP 未 来 医 生 开 处 方 中 的 应 用 5.2.5 基因敲除技术 概念： • gene knock-out,又称基因打靶。通过外 源DNA与染色体DNA之间的同源重组，精确 的定点修饰和改造基因。 经典遗传学（Forward genetics） • 从一个突变体的表型出发，研究其基因 型，进而找出该基因的编码序列。 现代遗传学（Reverse genetics） • 首先从基因序列出发，推测其表现型，进 而推导出该基因的功能。 基因敲除技术分为完全基因敲除和条件型基因 敲除两种。 • 完全基因敲除：通过同源重组法完全消除细 胞或动物个体中的靶基因活性。 r HSV neo tk 基因X 的置换载体 被破坏的基因X ，两侧与基因X 同源 同源重组 + ES 细胞 非同源重组 ES细胞DNA 其它的基因 基因X 插入靶基因 随机插入 基因X突变