医学博士开题报告输尿管部分梗阻的动物模型的制作PPT.ppt

* ?输尿管部分梗阻是一种常见的临床现象，可由多种因素引起，梗阻如不能及时解除，将导致肾积水，肾积水使肾盂内压力逐渐升高，压迫肾小管，肾小球及其附近的血管，造成肾组织缺血缺氧，肾实质逐渐萎缩变薄，肾容积增大，最后全肾成为一个无功能的巨大水囊。 ?临床上由输尿管梗阻引起的肾积水较常见，输尿管完全梗阻与不全梗阻引起肾的病理生理学变化有很大的不同[1,2]，输尿管梗阻大多数是部分梗阻。 立题依据 ?目前对于与梗阻性肾积水发生发展过程有关的分子改变事件进行了许多的研究,结果表明梗阻性肾病发生发展过程存在着复杂的分子调控机制，但在肾积水病理演变过程中,也涉及了一系列梗阻后肾形态学如肾血管方面的变化，梗阻前后肾血管形态上有着怎样的变化？以及梗阻解除后随着积水程度的减轻，肾血管形态是否相应的恢复，如何解释这些现象？形态学与分子机制之间有着怎样的联系？ 研究现状 ?输尿管部分梗阻的动物模型的制作 早在世纪中期就有学者进行研究，迄今为止已有多种输尿管部分梗阻模型报道，但各具优缺点，都有其相应的适用范围[3-10]： ?输尿管套管法 ?输尿管腰大肌隧道包埋法 ?输尿管不全结扎法 ?银夹半环夹法 ?输尿管内支架置入法 ?血管铸型填充剂 随着化工业的快速发展，不断出现新的铸型材料，血管铸型的方法也在不断的改进，常用的填充材料： 过氯乙烯[11,12,13] ABS [14.15] 自凝牙托材料[16,17] 聚甲基丙烯酸甲酯 [18,19] 环氧树脂[20] 化学反应成型法 铅、铋、锡、镉 铸 型 填 充 剂 溶剂挥发后凝固成型法 塑料填充剂 合金填充剂 目前国内外对于正常人、动物肾动脉及分支、肾小球的形态分布[14,15,30,31]作了研究，对于动物模型肾动脉及分支、肾小球的研究报道少见，尤其是肾积水模型方面尚未见报道，肾血管三维重建的研究亦未见报道。 梗阻性肾病的特征性病理学变化主要表现为肾小管萎缩和间质纤维化, 而肾小管上皮细胞凋亡是肾小管萎缩和肾实质丧失的重要原因[32,33]。 在肾积水的过程中，肾动脉及其分支、毛细血管内皮细胞是否有凋亡？凋亡的程度如何？凋亡与血管形态的改变有着怎样的关联？血管形态的改变在肾积水的病理演变过程中起着怎样的作用？未见相关报道。 因此，基于上述研究现状，得出研究题目： 输尿管部分梗阻血管重塑的形态学改变及机制 研究目的 1. 输尿管部分梗阻动物模型梗阻前、后、以及解除梗阻后的肾血管形态变化规律； 2. 对输尿管部分梗阻动物模型的血管灌注技术进行探索，以实现模型三维可视化； 3. 输尿管部分梗阻动物模型血管形态变化与肾血管内皮细胞凋亡的关系，为临床肾积水的防治提供理论依据。 研究方法、可行性分析 ?铸型： ?肾小球铸型：肾动脉插管，采用聚甲基丙烯酸填充剂灌注； ?肾盂肾盏铸型：输尿管插管，采用过氯乙烯和自凝牙托材料的混合填充剂 灌注； ?肾集合管铸型：输尿管插管，采用过氯乙烯填充剂灌注 ?扫描电镜：分别对梗阻前后肾小球和集合系统进行观察，比较。 ?三维重建：首先采用羧甲基纤维素/氧化铅水凝胶经肾动脉插管灌注，使用螺旋CT扫描，利用Mimics软件重建。 ?凋亡检测：石蜡切片采用TUNEL法原位检测血管内皮细胞凋亡，免疫组化检测Bcl-2 、bax 。 研究方法 可行性分析 ?输尿管部分梗阻模型已制备 本实验采用输尿管部分梗阻模型，输尿管部分梗阻模型报道的方法很多，各有优缺点，选择何种模型呢？通过预实验对输尿管套管法和输尿管不全结扎法两种造模方法的对比，发现输尿管套管法由于套管的刺激作用，粘连较重，解除梗阻较困难，输尿管不全结扎法对输尿管周围组织粘连轻，梗阻易解除，解除梗阻后尿流通畅； （图2） ?实验所需的药品试剂、仪器设备已具备： 药品试剂（图3）压力灌注器 （图4） ?技术路线的设计合理可行； ?在铸型技术上拟请一名经验丰富的技术员指导灌注； （图1） ?人员组成齐备 日本大耳白兔100只 梗阻观察组（O）48只 正常对照组 （N）12只 建模 O1组 O4组 O8组 扫描电镜 统计分析 技 术 路 线 图 肾盂、肾盏、 肾血管铸型 大体标本解剖 肾动脉分支、分段、 血供及管径测量 大体标本观测 假手术组（SO）4只 O2组 三维重建 血管形态 梗阻解除组36只 2周 4周 1周 肾小球形态观察 凋亡 TUNEL法 Bcl-2 、bax Hoechst 创新和特色 1.采用铸型技术对输尿管部分梗阻动物模型肾血管，肾盂肾盏、肾集合管进行灌注，对今后此类动物模型的铸型制作