sabin 株脊髓灰质炎病毒纯化液蛋白成分分析.pdf

中国生物制品学杂志2016 年11 月第29 卷第11 期 Chin J Biologicals November 2016 ，Vol. 29 No. 11 · · 1191 ·技术方法 · abin株脊髓灰质炎病毒纯化液蛋白成分分析 S 李爱灵，赵玉秀，刘小娟，董圆，李婉莉，梁宏阳，于守智，岳卓，赵硕，高波，张达伦，王辉 北京天坛生物制品股份有限公司，北京100024 摘要：目的 对本公司研发的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin 株脊髓灰质炎病毒纯化液进行蛋白成分分析及鉴定。方法 按照疫 苗生产工艺，应用NBS 篮式生物反应器生产单价脊髓灰质炎病毒原液，经超滤浓缩及分子筛和阴离子交换两步柱层 析纯化方法，收集并灭活蛋白峰。透射电镜下观察病毒形态及大小；ELISA 方法检测宿主细胞蛋白（host cell protein ， HCP）及残留牛血清白蛋白含量；HPLC 法分析单价灭活病毒纯化液纯度；液相色谱（liquid chromatography ，LC）与电 喷雾电离质谱（electrospray ionization-mass spectrometry ，ESI-MS）相结合的技术鉴定样品中所含蛋白成分。结果 Ⅰ、 Ⅱ、Ⅲ型Sabin 株脊髓灰质炎病毒纯化液中可见球形病毒颗粒，直径25 ～ 30 nm ；HCP、残余牛血清白蛋白含量分别 低于50 ng ／ ml、2. 5 μg ／ ml ；纯度大于95% ；单价脊髓灰质炎病毒样品中含有相应血清型的脊髓灰质炎病毒基因组 编码蛋白，且相应病毒蛋白成分数据库匹配相对分值在所含蛋白组分中均最高。结论 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin 株脊髓灰 质炎病毒液经纯化后，有效去除了杂质蛋白保留了病毒蛋白组分，单价病毒纯化液病毒蛋白成分明确，纯度较高， 为后续该疫苗的研发与生产提供了参考。 关键词：脊髓灰质炎病毒；纯化；蛋白成分 中图分类号：R373. 2 + 2 R392-33 文献标识码：A 文章编号：1004-5503 （2016）11-1191-06 DOI:10.13200/ki.cjb.001506 Analysis of protein composition of purified poliovirus Sabin strain LI Ai-ling, ZHAO Yu-xiu, LIU Xiao-juan, DONG Yuan, LI Wan -li, LIANG Hong-yang, YU Shou-zhi, YUE Zhuo, ZHAO Shuo, GAO Bo, ZHANG Da-lun, WANG Hui Beijing Tiantan Biological Products Co., Ltd., Beijing 100024, China Corresponding author: WANG Hui, E-mail: lal08@126.com Abstract ：Objective To analyze and identify the protein composition of purified poliovirus Sabin strain of types Ⅰ, Ⅱ and Ⅲ. Methods Monovalent bulk of poliovirus was prepared by using NBS basket bioreactor according to the production procedure of vaccine, concentrated by ul