21-毛细管电泳.ppt

目前应用最广泛的检测器 测量通过溶液后的紫外或可见光光强度的损失 吸光度与样品浓度呈线性关系 在被测物的最大吸收波长处检测时灵敏度最大 1. 紫外检测器(UVD) 朗伯—比尔定律 高灵敏度，高选择性 对多环芳烃，维生素B，黄曲霉素，卟啉类化合物，农药，药物，氨基酸，甾类化合物等有响应。 定量关系： 3. 荧光检测器(FD) 4、安培检测器(ECD) 适用于：氧化还原活性的物质，如：胺、酚、羰基、巯基化合物 原理：电极施加恒电位，当电活性成分经过时，发生氧化还原反应，产生电流。 流速一定时， 与流动相中的浓度有关。 特点：灵敏度高，适合痕量物质检测 5、蒸发光散射检测器(ELSD) 用氮气流动相混合喷雾形成小液滴， 通过一个加热的腔体除去流动相，溶质的挥发性小于流动相，因此产生气溶胶，进入检测室 光照后，气溶胶发生光散射 散射光由光电倍增管检测 散射光强度与溶质的存在量呈比例关系 7、色质联用HPLC-MS m/z +/- 电离源 质量分析器 色质联用仪器 色谱 质谱 2.主要部件 （1） 高压电源 （1）0～30 kV 稳定、连续可调的直流电源； （2）具有恒压、恒流、恒功率输出； （3）电场强度程序控制系统； （4）电压稳定性：输出精度高于1%； （5）电源极性易转换。 （2） 毛细管柱 （1）材料：玻璃、聚四氟乙烯、熔融石英：化学、电惰性，透紫外、可见光。 （2）规格：内径25～75μm，外径350～400μm；长度30-70cm。 仪器接地，漏电保护， 铂丝电极（0.5-1mm） 进样系统 毛细管柱内体积小，进样量为毛细管长度的1%～2%；纳升级、采用无死体积进样，毛细管直接与样品溶液接触，直接进样。 （1）进样端加压 （2）虹吸进样 （3）出口端抽真空 1、压力进样 压差（2000-6000Pa) 进样时间（1-10s） 无偏向，组分和基质同时进样，选择性差 2. 电动进样 存在的问题： 进样不均：淌度大的离子比淌度小的进样量大。 离子丢失：淌度大且与电渗流方向相反的离子可能进不去。 特别适合黏度大的试样。 电场：1-10kv 时间：1-10s 偏向性，准确性可靠性差，重现性差 3. 扩散进样 试样通过扩散作用进入分离柱端口处。 双向扩散，无偏向，抑制背景干扰，提高分离效率。 无电场，无压力 时间：10-60s 普适性进样方式 常用的检测方式是紫外-可见吸收。检测器位于距样品盘约毛细管总长的2/3～4/5处,对毛细管壁内部分进行光聚焦； 检测器 紫外检测器 在毛细管出口端是的位置除去不透明的保护涂层，让透明窗口对准光路，可实现柱上检测 激光诱导荧光（LIF） 采用激光为激发光（强度高，准直性好，可聚焦成比毛细管更细的光束射入毛细管内部），激发出强的荧光。 LIF能减小因毛细管壁的散射所引起的背景噪声。 1.激光器 2.高压电源 3.毛细管 4.单色器 5.光电倍增管 6.记录仪 8.激发光光纤 9.荧光收集光纤 本章小结 1、毛细管电泳原理 2、几个概念： 电渗和电渗率、电泳和电泳淌度、表观淌度 2、毛细管电泳分离模式 毛细管区带电泳、胶束电动毛细管色谱 3、毛细管电泳仪 电源、毛细管柱、进样系统、检测器 色谱部分复习 保留体积VR 调整保留体积VR 死体积V0 峰面积 相对保留值 保留指数 V=t.Fc；Fc为流动相流速 保留值 区域宽度 W1/2=2.335σ W=4σ W1/2 W t0 1、需要掌握的参数和公式 相对保留值： 对称因子fs： （对称峰，前延峰，拖尾峰） 分离度的计算公式： R=1.5，基线分离 分配系数： 容量因子（分配比）： 容量因子与保留值得关系： 2、需要掌握的理论 （1）、塔板理论 （2）、速率理论 速率方程（van Deemter方程）： 涡流扩散项 分子扩散项 传质阻抗项 H= A + B/u + C.u ⑴速率方程在GC中的表现形式 ⑵速率方程在HPLC的表现形式： 流动相流速提高，柱效降低。但是柱效变化不如气相大。 填充柱： 毛细管柱： 无涡流扩散，A=0 不同色谱下的速率方程 分析型柱子（内径4.6mm)：流速一般为1mL/min （3）、分离方程式 前提：定义式基础上，相邻两组分的n一致（假设） 柱选择项 柱容量项 柱效项 a b c 分离因子： 塔板数： 获得满意的分离效果：提高塔板数n、分离因子α、保留因子k 假设两组峰宽近似相等，存在公式： （分离方程式） k 影响保留时间 n 影响峰宽窄 α影响两峰间距 分离方程式的影响因素 3、色谱分离机制 （1）、四大色谱类型 离