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中国科技论文在线 RCAS 病毒鸡胚注射和感染方法的初步 研究# 张超，袁明婧，钟凯，叶军，袁立** 5 （厦门大学生命科学学院，福建 厦门 361005） 摘要：RCAS是一种来源于禽类劳氏肉瘤病毒（RSV）的逆转录病毒载体，具有独特的感染鸡 胚和细胞的能力。用它来表达shRNA在发育鸡胚细胞内沉默特定基因，可望形成对鸡胚这一 重要的模式动物应用于个体发育与基因功能研究方面的重要技术突破。本文通过大量实验研 究，初步建立了一套在鸡胚实施定时、定位基因沉默的技术方法。 10 关键词：发育生物学；RCAS；鸡胚注射；RNAi 中图分类号：Q95-336 The preliminary study of chicken embryos injection and infection with RCAS virus 15 Zhang Chao, Yuan Mingjing, Zhong Kai, Ye Jun, Yuan Li (School of Life Science, Xiamen University, FuJian XiaMen 361005) Abstract: RCAS is a kind of retroviral vectors based on chicken Rous sarcoma virus(RSV), which possess unique ability to infect chicken embryos or cells . Using such vectors to express shRNA in chicken embryos could be an important solution to the problem in making fully use of this 20 excellent experimental model for developmental and gene functional studies. In this paper, we report a primary establisment of the chicken RNAi technology with the RCAS vector system. Keywords: Development biology; RCAS; Chicken embryos injection; RNAi 0 引言 25 鸡胚作为发育生物学重要的模式动物之一，几个世纪以来被广泛应用于发育、免疫、病 毒及细胞生物学研究中, 与其他动物模型相比它具有很多与生俱来的优势[1] 。鸡胚可以非常 方便地获得，并可在其发育的任何阶段进行体外操作和直接观察，为研究提供了极大地便利。 近几年来，基因敲除技术在小鼠、爪蟾、斑马鱼等模式生物的研究中取得了重大进展， 但这些技术却无法在鸡胚中应用[2]，这是因为鸡蛋出生之后就已经发育至数万个细胞，无法 30 像小鼠一样对单个受精卵进行操作，只能通过将表达 shRNA 的干扰载体导入鸡胚中，实现 特定基因的表达敲低[3,4] 。在鸡胚导入基因干扰载体可能通过三种方法实现，即化学转染法、 电转和病毒感染法。化学转染法对鸡胚毒性大，极易造成鸡胚畸形甚至死亡，目前已基本放 弃使用。电转（Electroporation ）是目前对鸡胚实施瞬时转染的一种常用途径 [5,6,7] 。但这一