KJ201706 动物食品 瘦肉精胶体金.pdf

动物源性食品中瘦肉精胶体金免疫层析法 （KJ201706 ） 1 范围 本方法规定了动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的胶体金免疫层析快速检测 方法。 本方法适用于猪肉、牛肉等动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速测定。 2 原理 本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇与胶体金标记 的特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡中检测线 （T 线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深 浅的变化。通过检测线与控制线（C 线）颜色深浅比较，对样品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁 胺醇进行定性判定。 3 试剂与材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的二级水。 3.1 试剂 3.1.1 甲醇：色谱纯。 3.1.2 氢氧化钠。 3.1.3 磷酸二氢钾。 3.1.4 磷酸氢二钠。 3.1.5 盐酸。 3.1.6 氯化钠。 3.1.7 氯化钾。 3.1.8 三氮化钠。 3.1.9 乙二胺四乙酸二钠。 3.1.10 三羟甲基氨基甲烷，即Tris 。 3.1.11 乙酸乙酯。 3.1.12 磷酸二氢钠。 3.1.13 氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取氢氧化钠（3.1.2 ）4g ，用水溶解并稀释至100mL。 3.1.14 缓冲液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3 ）0.3g，磷酸氢二钠（3.1.4 ）1.5g，溶于约 800mL 水 中，充分混匀后用盐酸（3.1.5 ）或氢氧化钠溶液（3.1.13 ）调节pH 至7.4，用水稀释至1000mL， 混匀。4 ℃保存，有效期三个月。 3.1.15 展开液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）2g ，磷酸氢二钠（3.1.4 ）1.44g，氯化钠（3.1.6 ）8g， 氯化钾（3.1.7 ）0.2g，三氮化钠（3.1.8 ）0.5g，乙二胺四乙酸二钠（3.1.9 ）1.0g 溶于约500mL 水 中，充分混匀后用水稀释至1000mL。 3.1.16Tris 缓冲液（pH9.0 ，1mol/L）：称取Tris （3.1.10 ）121.14g，溶于约700mL 水中，充分混匀 后加入盐酸（3.1.5 ）调试pH 至9.0 后用水定容至1000mL。 3.1.17Tris 缓冲液（pH9.0 ，10mmol/L）：精密量取1mol/LTris 缓冲液（3.1.16 ）1mL，用水稀释定 容至100mL。 3.1.18 磷酸二氢钠溶液（0.2mol/L ）：称取磷酸二氢钠（3.1.12 ）24.0g，用水溶解并稀释至1000mL。 3.1.19 磷酸氢二钠溶液（0.2mol/L ）：称取磷酸氢二钠（3.1.4 ）28.4g ，用水溶解并稀释至1000mL。 3.1.20 磷酸盐缓冲液（pH7.4 ，0.2mol/L ）：量取磷酸二氢钠溶液（3.1.18 ）19mL，加入81mL 磷酸 氢二钠溶液（3.1.19 ），混匀。 3.1.21 磷酸盐缓冲液（pH7.4 ，10mmol/L ）：精密量取0.2mol/L 磷酸盐缓冲液（3.1.20 ）50mL，用 水稀释至1000mL。 3.2 参考物质 克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇参考物质的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、 相对分子量见表1，纯度≥97%。 表1 克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇参考物质的中文名称、英文名称、 CAS 登录号、分子式、相对分子质量 序号 中文名称 英文名称 CAS 登录号 分子式 相对分子质量 1 克伦特罗 Clenbuterol 37148-27-9 C H Cl N O 277.19 12 18 2 2 2 莱克多巴胺 Ractopamine 97825-25-7 C18H23NO3 301.38 3 沙丁胺醇 Salbutamol 18559-94-9 C13H21NO3 239.31 注：或等同可溯源物质。 3.3 标准溶液配制 3.3.1 标准储备液