上海交大医学院生殖考试重点.docx

精子成熟与受精1、要注意实验动物与人的差别反应停事件：反应停（沙利度胺，Thalidomide ），于20 世纪50至60年代初期在全世界广泛使用，它能够有效地阻止女性怀孕早期的呕吐，但也妨碍了孕妇对胎儿的血液供应，导致大量“海豹畸形婴儿”出生。进入临床前已经考察过怀孕大鼠影响，不引起致畸。沙利度胺对灵长类动物有很强的致畸性，大鼠和人不一样，体内缺少一种把“反应停”转化成有害异构体的酶，不会引起畸胎。第1部分：常用技术 转基因Transgenic：是将外源基因导入受精卵或胚胎干细胞（ES）中，通过随机重组使外源基因插入细胞染色体DNA，再将受精卵或者胚胎干细胞植入受体细胞的子宫，使得外源基因能够随细胞分裂遗传给后代。全基因敲除Conventional Knockout：属于基因打靶技术的一种，是利用细胞染色体DNA可以与导入的外源DNA在相同序列的区域发生同源重组的现象，在胚胎干细胞中定点破坏内源基因，然后利用胚胎干细胞发育的全能性，获得带有预定基因缺陷的杂合子，通过遗传育种最终获得目的基因缺陷的纯合个体。条件性基因敲除Conditonal Knockout：条件性基因敲除策略主要包括三个方面:(1)制备 Cre转基因小鼠。 该小鼠的 Cre表达受控于一个组织特异性启动子。 (2)通过胚胎干细胞和同源重组制备目的基因两侧带有 loxP位点的基因打靶小鼠。 (3)制备目的基因敲除的小鼠。通过 Cre转基因小鼠和基因打靶小鼠杂交, 获得双重转基因小鼠, 因 Cre的时空特异性表达, 使得两侧具有 loxP位点的基因片断被敲除, 导致基因功能的丧失。通过Cas9进行基因靶向：CRISPR/Cas9 是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御，可用来对抗入侵的病毒及外源DNA。crRNA（ CRISPR-derived RNA ）通过碱基配对与 tracrRNA （trans-activating RNA ）结合形成 tracrRNA/crRNA 复合物，此复合物引导核酸酶 Cas9 蛋白在与 crRNA 配对的序列靶位点剪切双链 DNA。优点：简单，快速，能同时做多个基因突变, 并且能够修复缺损基因；缺点：可能会脱靶第2部分：附睾与精子成熟（精子雄性生殖道成熟 ）附睾上皮功能及其调节（1）附睾上皮细胞类型： 主细胞、透明细胞、基细胞、晕细胞、狭窄细胞、顶细胞（2）附睾上皮的功能：附睾管道的上皮有吸收、分泌、浓缩功能。（3）附睾功能调节：附睾分泌蛋白区域性的调节、雄激素和睾丸因子的调节（附睾结构和功能的维持和基因表达依赖于雄激素）雄激素受体在附睾中表达最高、雌激素的调节作用、精子对附睾功能的调节。精子在附睾成熟过程中的特征性改变：精子形态结构的变化精子核的成熟变化精子膜的变化：膜转运能力、糖基、脂成分、膜蛋白膜上硫巯基逐渐被氧化为二巯基能量代谢：糖酵解和线粒体呼吸作用附睾精子运动能力的获得和发育：附睾液很少，很粘稠，附睾液中的精子处于静止状态，混合入精浆后运动能力加强。与精子运动有关的结构调控：鞭毛结构的调控（巯基的变化）附睾精子的能量系统发育：精子线粒体功能的进一步完善精子信号系统的整合：cAMP、pH、游离Ca+浓度的变化附睾液中的某些成分的影响：前向运动蛋白附睾精子受精能力的获得和发育：附睾管腔里某些蛋白分子从头部到尾部发生浓度改变，精子在附睾运输过程中一些膜表面蛋白去除等一系列过程使精子获得受精能力。（受精是指精子和卵子融合形成受精卵的过程，包括精卵识别和精卵膜的融合。）PH-20蛋白具有透明质酸酶的活性，会在精子膜上重新分布和浓度变化精子对透明带的粘附和识别在附睾中发育，参与的蛋白为P26h/P34H蛋白此外酸性糖蛋白（DE/AEG）和人睾丸分泌蛋白HE1-HE6与精子受精能力获得相关。5、附睾基因表达特点：（1）高度区域特异性（2）细胞特异性（3）雄激素调控6、附睾功能：（1）精子成熟：运动能力的获得、受精能力的获得、调节获能和顶体反应（2）精子储存：精子保护（3）精子运输（4）重吸收（5）质量控制（6）精子的表观遗传修饰：因父母饮食而产生的代谢障碍可能由后代遗传第3部分：精子与女性生殖道上皮细胞相互作用 1、精子通过女性生殖道迁移2、精子与女性生殖道中的体细胞相互作用第4、5部分：（精子在女性生殖道成熟 ）第4部分：获能Robert G. Edwards（1925‐2013）：试管婴儿之父1978， 2010年诺贝尔生理学或医学奖、张明觉（1908-1991），获能1951获能（capacitation）：精子在雌性生殖道停留一段时间才能具有受精能力的过程。本质是暴露精子膜表面与卵子识别、结合的特异性位点或受体，解除对顶体的封闭。3、获能过程：第一时相在子宫内，第二时相在输卵管内；去除精子表面被附睾分泌的去